Хромосомный анализ

Приготовление препаратов хромосом. В зависимости от пролиферативной активности клеток разных тканей in vivo и in vitro различают прямые и непрямые методы получения препаратов хромосом. 1) прямые методы используются при исследовании тканей, обладающих высокой митотической активностью (костный мозг, хорион и плацента, клетки лимфатических узлов, ткани эмбриона на ранней стадии, фибробласты и эпителий). Препараты готовят сразу после забора материала. 2) непрямые методы включают получение препаратов хромосом из любой ткани после ее культивирования в течение какого-либо времени. Существует множество модификаций этих методов, однако основные этапы получения метафазных пластинок неизменны: 1)используют колхицин – ингибитор образования митотического веретена, останавливает деление клетки на стадии метафазы. 2) гипотонический шок (KCL, NaCL, цитрат Na) – приводит к набуханию и разрыву межхромосомных связей. Такая процедура способствует отделению хромосом друг от друга, способствуя их разбросу в метафазных пластинках. 3)фиксация клеток в ледяной уксусной кислоте и метаноле (3:1) – это сохраняет структуру хромосом. 4) раскапывание суспензии клеток на предметные стекла. 4) окрашивание. В зависимости от стадии клеточного цикла, возможно проведение следующих цитогенетических исследований: - анализ интерфазных хромосом (оценка анеуплоидии) – анализ профазных хромосом – анализ прометафазных хромосом – анализ метафазных хромосом (традиционный анализ ФГА-стимулированных лимфоцитов периферической крови) – стадии анафазы и телофазы (воздействие мутагеннх факторов).

Показания для проведения цитогенетического анализа:

1) Нарушение репродуктивной функции неясного генеза у мужчин и женщин: а)спонтанные аборты в разных сроках (2 и более), мертворождение или рано умершие дети; б) первичная аменорея(отсутствие менструаций в течение 6 мес и более); в) мужская и женская стерильность при исключении гинекологической патологии у женщин.

2) Наличие у ребенка множественных врожденных пороков развития (МВПР).

3) Задержка умственного и физического развития у ребенка.

4) Подозрение на хромосомную болезнь по клинической симптоматике: - изменение формы и размеров черепа (долихоцефалия, микроцефалия, гидроцефалия, краниостеноз) – изменение вида лица и его пропорций – аномалии конфигурации и расположения лба (низкий, выступающий, килевидный, в форме трилистника и тд.) – аномалии глаз (антимонголоидный разрез глаз, гипертелороизм и тд.) – аномалии подбородка – аномалии носа – аномалии ушных раковин – аномалии челюсти – изменение пальцев – аномалия внешних гениталий – изменение кожи и кожных покровов.

5) Подозрения на синдромы, характеризующиеся хромосомной нестабильностью (учет хромосомных аббераций и СХО).

6) Оценка мутагенных воздействий.