Определение ОКБ и ТКБ титрационным методом

При качественном исследовании воды засевают 3 объема по 100 мл.

Для количественного определения ОКБ и ТКБ производят посев: 3-х объемов по 100 мл, 3-х объемов по 10 мл и 3-х объемов по 1 мл.

100 мл 100 мл 100мл 10 мл 10 мл 10 мл 1 мл 1 мл 1 мл

Посевы производят в жидкую лактозо-пептонную среду двойной концентрации, для объема 100мл — 10мл среды, для объема 10 мл — 1 мл среды; для объема 1 мл — 10 мл среды обычной концентрации.

Инкубируют при t 37^оС — 24-48 часов.

Через 24 часа при обнаружении помутнения и газообразования производят пересев петлей на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Ёмкости без наличия роста оставляют ещё на 24 часа.

10,0 10,0

100,0 Посевы инкубируют при t 37^оС 20 часов

При наличии типичных темно-красных колоний дают положительный ответ на наличие ОКБ. Отношение выделенных колоний к ОКБ требуется подтверждать в том случае, если в среде накопления отмечено только помутнение, если колонии на среде Эндо слабо окрашены (розовые)

Для подтверждения проводят:

-оксидазный тест;

-окраску мазка по Граму;

-пересев на среду с лактозой при t 37^оС с инкубацией в течение 24 часов.

Оксидазаотрицательные грамотрицательные бактерии, дающие кислоту и газ (КГ) на среде с лактозой при t 37^оС учитывают как ОКБ.

Для определения термотолерантных колиформных бактерий из типичных темнокрасных колоний на среде Эндо делают пересев на прогретую при температуре 44 ^оС среду с лактозой и инкубируют при при t 44± 0,5^оС 24 часа. При обнаружении кислоты и газа (КГ) учитывают как ТКБ.

Учет результатов:

При отрицательном ответе (отсутствие роста на средах) выдают заключение:ОКБ/ТКБ не обнаружены в 300 мл.

При качественном исследовании пишут: обнаружено в 300 мл.

При количественном методе определяют НВЧ ОКБ и ТКБ по таблице (приложение – таблица № 1.1 из МУК-4.2.1018 -01).

ТАБЛИЦА № 2