Имуннобиологические препараты для диагностики, лечения и профилактики раневых инфекций

1. Противостолбнячная антитоксическая сыворотка — нейтрализует действие столбнячного токсина (диагностика, лечение и профилактика)

2. Столбнячный анатоксин — входит в состав АКДС (коклюшно-столбнячно-дифтерийная вакцина) — для вакцинации.

Методы лабораторной диагностики

1. Биологическая проба (основной метод) — реакция нейтрализации токсинов.

2. Микроскопический метод

3. Бактериологический метод (при отрицательной биопробе с целью получения чистой культуры и повтора с ней биопробы).

Биологические особенности клостридий столбняка

Возбудитель столбняка Clostridium Tetani относится к роду Клостридий (анаэробных Гр+ спорообразующих палочек).

Морфология: крупные (4-8 мкм), палочки с закругленными краями. Споры располагаются терминально, что придает вид барабанной палочки. Подвижны, перетрихи. Тинкториальные свойства: Гр+. Метаболизм: ферментативный, хемоорганотрофы. Тип дыхания: строгий анаэроб.

Патогенетический признак — экзотоксин (тетаноспазмин и тетанолизин), вызывающий гемолиз эритроцитов.

Культивирование: растут в анаэробных условиях при 37 градусах Цельсия на среде Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, агаре Цейсслера через 72 часа.

Культуральные свойства: помутнение Китта-Тароцци, на среде Вильсона-Блера — в толще агара темные колонии в виде пушинок, на агаре Цейсслера — прозрачные колонии с зоной гемолиза.

Биохимические свойства: сахаролитически не актвен.

Протеолитические свойства: медленно разжижает желатину, свертывает молоко, восстанавливает нитриты и нитраты.

Антигенные свойства: по О и Н антигену различают 10 сероваров, однако все они продуцируют токсин одного типа (видовой).

Алгоритм микробиологического исследования при столбняке

Первый день

Микроскопия исследуемого материала — окраска по Граму и по Ожешко. Наличие Гр+ спороносных (барабанных) палочек позволяет выдать ориентировочный ответ: клостридии. Исследуемый материал делят на две порции (для биопробы и бакисследования).

Часть материала засевают на среду накопления Китта-Тароцци и культивируют в анаэробных условиях при 37 градусах Цельсия в течение трех дней.

Для постановки биопробы из другой части материала экстрагируют анатоксин. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают физ.раствором для экстракции токсина на 1 час и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат токсина делят на 2 порции.

Первая порция опытная, вторая порция контрольная — в нее добавляют противостолбнячную сыворотку и для нейтрализации токсина оставляют на 1 час. В опыт берут две пары мышей которым внутримышечно вводят: первой (опытной) паре мышей — фильтрат токсина без сыворотки, второй паре (контрольной) — фильтрат токсина с сывороткой.

Через 1-2 суток в опытной группе мышей появляются признаки столбняка: ригидность конечностей, хвоста (хвост трубой). Затем животные погибают в характерной позе: поджав передние лапки и вытянув задние. У контрольных мышей получивших антитоксическую сыворотку заболевания не возникают.

На основании положительной биопробе ставится окончательный диагноз: столбняк.

При отрицательном результате биопробы (все мыши живы) продолжают бактериологические исследования.

Со среды накопления Китта-Тароцци (2-3 сутки) делают пересевы на агар Цейсслера, культивируют в анаэробных условиях, изучают культуральные свойства (прозрачные колонии с зоной гемолиза), микроскопируют.

На 4-5 день для выделения чистой культуры пересевают на среду Китта-Тароцци и ставят биопробу с чистой культурой.

При отрицательном результате выдается отрицательный ответ.