Проведение серологических реакций

Посуда для постановки серологических реакций должна быть чистой и сухой. Применяют пробирки — агглютинационные, преципитационные, центрифужные; пипетки градуированные и пастеровские; чашки Петри, предметные стекла, пластины из пластмассы с лунками.

Необходимы бак.петли, штативы, лупа, агглютиноскоп, термостат, холодильник, центрифуга.

Материалы: антитела — иммунные и исследуемые сыворотки, антигены — культуры микроорганизмов, диагностикумы, экстракты, лизаты, эритроциты, комплемент, физ.раствор.

Сыворотки

Сыворотка больного (исследуемая). Ее берут к концу первой или на второй неделе болезни, когда можно ожидать наличие в ней антител. Иногда используются сыворотки реконвалесцентов и переболевших. Чаще сыворотку получают из крови, взятой из вены в количестве 3-5 мл в стерильную пробирку и направляют в лабораторию, сопровождая этикеткой, с указанием фамилии и инициалов больного, предполагаемого диагноза, даты забора крови. Кровь следует брать натощак, или через шесть часов после еды. В сыворотке крови после еды могут содержаться капельки жира, которые делают ее мутной и непригодной к исследованию (такая сыворотка называется хилезной). При взятии крови нужно соблюдать асептику. Из крови получают сыворотку путем фильтрования или отстаиванием. Исключение: для получения сыворотки кровь можно брать из прокола мякоти пальца, из мочки уха пастеровской пипеткой, из V-образного разреза на пятке у грудных детей.

Иммунные сыворотки получают из крови людей или животных (кролики, лошади), иммунизированных по определенной схеме соответствующим антигеном (вакциной). В полученной сыворотке определяют активность (титр), т. е. наибольшее разведение, в котором она реагирует с соответствующим антигеном в определенных условиях опыта. Готовят сыворотки на производстве, разливают в ампулы, на которых указывают название и титр. В большинстве случаев сыворотки высушивают и перед работой растворяют физ.раствором или дистиллированной водой до объема, указанного на этикетке. Хранят сухие (лиофилизированные) сыворотки при 4-6 градусах Цельсия.

Для иммунных реакций применяют нативные сыворотки (неадсорбированные) и адсорбированные. Недостаток нативных сывороток — наличие в них групповых антител, то есть антител к микроорганизмам, имеющим общие антигены. Адсорбированные сыворотки отличаются строгой специфичностью: реагируют только с родственными антигенами. Антитела к другим антигенам удалены адсорбцией. Титр антител адсорбированных сывороток низкий (1:40, 1:320), поэтому их серийно не разводят. Неадсорбированные разводят серийно до титра, указанного на этикетке.

Диагностикумы (известные антигены):

1. Корпускулярный — взвесь убитых микроорганизмов определенного вида. Мутный.

2. Молекулярный — гаптен экстракт, лизат микробной клетки. Прозрачный

3. Эритроцитарный — на эритроците адсорбирован микробный антиген.