Нормальные величины (обе реакции)

В мазках периферической крови липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69 - 80%) у здоровых людей красятся интенсивно (+++), 18-36% дают окраску средней интенсивности (++) и 10% слабо окрашены (+). Средний цитохимический коэффициент (СЦК) липидов в нейтрофилах 2,617 - 2,683. В мазках костного мозга в миелобластах обнаружено небольшое содержание липидов, в промиелоцитах их больше и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается. В моноцитах и их предшественниках часто содержится различное число мелких или умеренно крупных гранул, распределенных по всей клетке, с некоторой тенденцией к концентрированию в перинуклеарной зоне или ободке цитоплазмы. Эритрокариоциты, ретикулоциты и зрелые эритроциты не содержат суданофильных гранул. В клетках лимфоидного ряда липиды не выявляются.

Клиническое значение

Отмечено повышение СЦК липидов у лиц старческого возраста. Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при острых лейкозах и обострении хронических лейкозов. При острых лейкозах липиды в бластных клетках обнаружены у больных при миелобластном и монобластном вариантах и не выявлены при лимфобластном остром лейкозе. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки лишь в небольшом количестве (1,38 - 3,02%) содержат липиды.

Уменьшение липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах, лечебном голодании.

Цитохимическое исследование гликогена

Гликоген локализуется в цитоплазме клеток и играет важную роль в энергетическом метаболизме клеток. При цитохимическом исследовании гликогена используют главным образом PAS-реакцию или ШИК-реакцию (по названию реактивов - шифф-йодная кислота).

Метод Шабадаша

Под влиянием перйодата калия гликоген окисляется с образованием альдегидных соединений, легко реагирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернистая кислота). В местах локализации гликогена выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание, по интенсивности которого можно судить о количестве гликогена в клетках.

Посуда и оборудование

· Химические стаканы емкостью 50 мл или кюветы.

· Мерные цилиндры.

· Градуированные пипетки.

· Колбы емкостью 250 мл.

· Воронки.

· Горелки.

· Термостат.

· Весы.

Реактивы

· 0,03 М раствор перйодата калия или натрия: 230 мг перйодата растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Готовят перед употреблением.

· Реактив Шиффа: 1 г основного фуксина растворяют в 200 мл кипящей дистиллированной воды. По мере охлаждения в раствор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Оставляют на сутки. Для полного обесцвечивания добавляют растолченную таблетку карболена, оставляют на сутки, затем фильтруют. Реактив сохраняют в темноте (лучше на холоде) в плотно закрытой посуде. Годен к употреблению в течение нескольких месяцев (легкая степень покраснения свидетельствует о непригодности реактива).

· Сернистая вода: к 10 мл 10 % раствора метабисульфита калия добавляют 200 мл дистиллированной воды и 10 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Готовят перед употреблением.

· Реактив Шабадаша: к 100 мл этилового спирта добавляют 1,8 г нитрата меди, 0,9 г нитрата кальция и 10 мл формалина.

· 1 н. раствор соляной кислоты (82,5 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 доливают дистиллированной водой до 1 л).

· 0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой краски (лихтгрюн).

Ход окраски

· Препараты фиксируют (тотчас после приготовления) в жидкости Шабадаша в течение 30 мин.

· Промывают в двух сменах дистиллированной воды.

· Погружают в раствор перйодата на 20 мин (в темноте).

· Промывают в трех сменах дистиллированной воды.

· Ополаскивают в сернистой воде (в течение 1 - 2 мин).

· Окрашивают реактивом Шиффа в течение 30 - 40 мин (в темноте).

· Промывают в трех сменах сернистой воды по 3 мин.

· Промывают в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.

· Окрашивают светло-зеленой краской в течение 10-20 с.

· Промывают в дистиллированной воде.

Для проведения реакции удобно все растворы поместить в химические стаканчики или кюветы и переносить препараты в указанной выше последовательности.

В настоящее время существуют реагенты для цитохимического исследования на гликоген заводского производства, которые более просты в применении. К сожалению, не все из них обладают хорошим качеством.