Основные питательные среды. Простые питательные среды

К простым питательным средам относятся: мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода, питательная желатина.

Режим стерилизации питательных сред зависит от ее состава.

1. Простые питательные среды (МПА, МПБ, пептонная вода) — автоклав 1 атм. 20-30 минут.

2. Питательные среды с углеводами, молоком, желатином — автоклав 0,5 атм 15 минут или текучим паром 100ºС 1 час 3 дня.

3. Питательные среды, содержащие свернутую сыворотку и яичный белок свертыватель Коха 85ºС 1 час 3 дня.

4. Белковые среды — водяная баня 56ºС 1 час 5 дней

Перед стерилизацией посуду со средой закрывают ватно-марлевыми пробками, надевают бумажные колпачки. Количество среды не должно превышать 2/3 объема, чтобы не замочить пробки. Среды разливают в пробирки, колбы, флаконы и стерилизуют. Для контроля стерилизации среду помещают в термостат (37ºС) на двое суток. Отсутствие роста бактерий говорит о стерильности среды. Стерильные среды хранят в холодильнике за исключением сред с кровью (при комнатной температуре). Перед розливом агарной среды ее кипятят до полного растворения, после чего охлаждают до 50ºС и соблюдая правила асептики разливают в чашки Петри (при приоткрытой крышке 12-15 мл), в пробирки (столбиком - 5 мл, высоким столбиком - 10 мл, скошенным столбиком — 7 мл и укладывают пробирку под 30º, комбинированным столбиком — 7 мл и укладывают пробирку под 45º).

Занятие 2. Сложные и дифференциально-диагностические среды. Техника первичных посевов.

Знать:

1. Применение сложных питательных сред

2. Рецептуру СБ, СА, КА, Сах Б, Сах А, режимы стерилизации

3. Применение ДДС, их состав

4. Методики посева на плотные среды — шпателем, тампоном, бак.петлей, градуированными и пастеровскими пипетками.

Уметь:

1. Приготовить СБ, СА, Сах Б, Сах А, Эндо, ЭМС, Проскирева

2. Провести первичные посевы на жидкие, плотные среды

Сложные среды готовят, добавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма

1. Сах Б: к МПБ + определенное количество (0,1-2%) углевода, например глюкозы, перемешать, разлить в посуду и стерилизовать паром под давлением — 0,5 атм. 15 минут.

2. Сах А: к МПБ + 0,1-2% определенного углевода +2-3% расплавленного агара. Или к МПА + 0,1-2% определенного углевода, перемешать, разлить в посуду и стерилизовать при 0,5 атм. 15 минут.

3. Кровяной агар (КА). Готовят из стерильных простых сред, добавляя к ним в асептических условиях (работая в боксе) 3-5% крови.

Агаровые среды предварительно растапливают и остужают до 45ºС. После добавления крови, среду перемешать и разлить в стерильные чашки, оставив небольшую щель, чтобы не скапливался конденсат на внутренней поверхности крышки. Растапливать среды с кровью нельзя, т. к. она изменит свои свойства.

4. Среды с сывороткой: сывороточный бульон (СБ), сывороточный агар (СА).

Готовят из простых, стерильных сред (МПБ, МПА), добавляя в асептических условиях 10-20% инактивированной, не содержащей консервантов сыворотки. Инактивируют сыворотку при 56ºС 30 минут на водяной бане для разрушения комплемента, который губительно действует на микроорганизмы. Сыворотку осторожно вносят в простую среду, чтобы не было интенсивного пенообразования. Перемешать, разлить в стерильные чашки, пробирки.

5. ЖСА.