Определение протеолитической активности микробов

Для определения данной активности исследуемую культуру микроба засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок.

Посев на желатин. К МПБ добавляют мелко нарезанный желатин на 100 мл 10-15гр. Она набухает и растворяется при медленном нагревании. Добавляют 10% раствор питьевой соды до PH = 7, фильтруют. Разливают в пробирки столбиком. Стерилизуют текучим паром. При наличии желатиназы происходит расщепление белков желатины в форме: «чулка» - стафилококк, «воронки» - холерный вибрион, «перевернутой елочки» - возбудитель сибирской язвы. Наблюдение за посевом ведется до 20 суток.

Определение индола по Мореллю. Индол образуется при расщеплении триптофана. На исследуемую культуру засевают в б/м Хоттингера, где содержится триптофан. Сразу после посева под пробку вносят полоску индикаторной бумаги, пропитанную щавелевой кислотой. Посевы инкубируют при 37С 24-48 часов. Образование индола в бульоне сопровождается окрашиванием нижнего конца индикаторной бумаги в слабо розовый цвет.

Определение индола с помощью реактива Ковача. В пробирку наливают 5 мл исследуемой культуры. Вносят 1 мл ксинола или эфира, встряхивают. После отстаивания осторожно добавляют раствор Ковача так, чтобы он образовал слой между ксинолом и средой. При положительной реакции появляется красное кольцо. Реакция высоко чувствительная.

Проба на H₂S. Исследуемую культуру засевают на питательную среду, содержащую сульфат железа. При появлении H₂S среда чернеет за счет образования сернистого железа. Образование H₂S связано с расщеплением серосодержащих аминокислот, чаще цистеина. Определить H₂S можно с помощью индикаторной бумажки, пропитанной ацетатом свинца — бумажка чернеет.