Определение активности каталазы в растительных объектах

В процессе дыхании в качестве побочного продукта окисления веществ образуется перекись водорода, оказывающая в высоких концентрациях токсическое действие на цитоплазму. Обезвреживание перекиси происходит при участии фермента каталазы, разлагающей её на воду и молекулярный кислород по уравнению:

2Н₂О₂ → 2Н₂О₂ + О₂

Об активности каталазы судят по объёму кислорода, выделившегося в результате разложения перекиси водорода.

Для определения пользуются прибором, который состоит из каталазника, бюретки ёмкостью 50 мл². и стеклянной груши, соединённых каучуковыми трубками и стеклянным тройником. Каучуковая трубка на свободном конце тройника снабжена винтовым зажимом. Бюретка и стеклянная груша закреплены в штативе. Их заполняют дистиллированной водой до половины объёма.

Ход работы: 0,5 гр. Листьев растирают в фарфоровой ступке с кварцевым песком и добавляют 0,5 гр. Мела для создания щелочной реакции (РН 7,7 – оптимальный для данного фермента).

Во время растирания вливают небольшими порциями 20 мл. воды, смесь вносят в одно колено каталазника. В другое колено помещают 5 мл. трёхпроцентной перекиси водорода.

Затем, всё время потряхивая каталазник, по понижению уровня воды в бюретке отмечают объём кислорода в млиллитрах, выделенного в течение трёх минут на один грамм веса сухого материала.

Статистическую обработку экспериментальных данных, обобщение и усреднение результатов исследований проводили методом дисперсионного анализа, согласно методическим указаниям по проведению полевых опытов с учетом специфики многолетних культур. При обработке материала и оценке результатов исследований применяли пакет статистических программ Statistic 6.0 и математический пакет программ MS Excel XP.