Дослід 2. Якісне визначення вітаміну D2 (ергокальциферолу)

Кальцифероли – вітаміни групи D – складаються з двох підгруп:

1) природних: D₂ – ергокальциферол (рис. 2), D₃ – холекальциферол; D₄– дегідроергокальциферол;

2) синтетичних: D₅, D₆, D₇.

Природні та синтетичні кальцифероли є аналогами природного вітаміну D₃ відрізняються від нього боковим аліфатичним ланцюгом у 17-му положенні.

Матеріали та реактиви: газовий пальник, пробірки, піпетки, концентрована хлоридна кислота, анілін, вітамінізований риб'ячий жир.

Принцип методу. При нагріванні хлороформного розчину вітаміну D або риб’ячого жиру із сумішшю аніліну та концентрованої хлоридної кислотою розчин забарвлюється у червоний колір.

Рис.2. Структурна формула вітаміну D₂ (ергокальциферол).

Хід роботи. В суху пробірку наливають 1 мл вітамінізованого риб’ячого жиру, додають до нього 5 мл аніліну і 0,5 мл концентрованої хлоридної кислоти. Після перемішування утворюється емульсія жовтого кольору. Вміст пробірки нагрівають на відкритому полум’ї до кипіння впродовж 0,5 хв. Емульсія забарвлюється в червоний колір.

Дослід 3. Якісне визначення вітаміну Е (токоферол)

Вітамін E – група жиророзчинних біологічно активних речовин (токофероли (рис. 3) та токотріеноли), що проявляють антиоксидантні властивості.

Рис. 3. Структурна формула токоферолу (вітамін Е).

Матеріали та реактиви: пробірки, піпетки, концентрована нітратна кислота, 0,1% спиртового розчину вітаміну Е.

Принцип методу. При дії концентрованої нітратної кислоти на спиртовий розчин вітаміну Е, останній забарвлюється в червоний колір у результаті окислювання a-токоферолу до кольорових продуктів хіноїдного ряду.

Хід роботи. У сухій пробірці змішують за енергійного струшування 5 крапель 0,1% спиртового розчину вітаміну Е і 10 крапель концентрованої нітратної кислоти. Верхній масляний шар емульсії забарвлюється в червоний колір.

Дослід 4. Якісне визначення вітаміну В₂ (рибофлавін)

Рибофлавін (вітамін В₂) за хімічною природою – це диметилзаміщена похідний ізоалоксазину, зв’язаного в положенні 9 із залишком п’ятиатомного спирту рибіту. Рибофлавін, зв’язаний з фосфатною кислотою, входить до складу флавінових ферментів. У процесі відновлення вітамін В₂ (має жовтий колір) спочатку переходить у проміжну сполуку червоного кольору, а потім – у безбарвний лейкофлавін (рис. 4). У кислому середовищі вітамін В₂ стійкий, а у лужному середовищі – руйнується

Рис.4. Механізм дії перетворення рибофлавіну в безбарвний лейкофлавін

Матеріали та реактиви: пробірки, піпетки, концентрована хлоридна кислота, металевий цинк, 0,025%-й розчин вітаміну В₂ (суспензія рибофлавіну у воді).

Принцип реакції. Водень, що утворюється при додаванні металевого цинку до концентрованої хлоридної кислоти, відновлює жовтий рибофлавін спочатку в родофлавін (проміжна сполука) червоного кольору, а потім у безбарвний лейкофлавін.

Хід роботи. В пробірку налити 1,5 мл 0,025%-го розчину рибофлавіну і 1 мл концентрованої хлоридної кислоти, потім додають кусочки металевого цинку. Водень, що виділяється, реагує з рибофлавіном, відновлюючи його і рідина поступово забарвлюється в рожевий колір, а потім знебарвлюється. Якщо рідина залишається червоною, необхідно ще додати шматочки металевого цинку.

При збовтуванні знебарвленого розчину лейкофлавін знову окисляється киснем повітря в рибофлавін.