Способы стерилизации посуды и питательных сред

Основываясь на влиянии внешних условий на микроорганизмы, в микробиологической практике разработан ряд приемов, приводящих микроорганизмы к гибели. Одним из таких приемов является стерилизация.

Под стерилизацией (обеспложиванием) понимают полное уничтожение микроорганизмов и их спор в питательных средах, посуде, на инструментах и других предметах лабораторного оборудования. Для этого наиболее часто пользуются воздействием высокой температуры.

Стерилизация обжиганием на пламени горелки

Небольшие стеклянные (палочки, шпатель) и металличе­ские предметы (игла, петля, пинцет, скальпель) проводят не­сколько раз через пламя горелки. Стерилизация достигается обугливанием находящихся на их поверхности микроорганиз­мов. Обжиганием на пламени пользуются для стерилизации по­верхности ватных пробок, горла посуды.

Стерилизация кипячением

Стерилизацию металлических инструментов и резиновых трубок проводят кипячением. Так как споры некоторых бакте­рий сохраняют жизнеспособность при кипячении в воде в те­чение нескольких часов, то рекомендуется стерилизацию кипя­чением проводить в 2%-ном растворе карбоната натрия в тече­ние 10 мин. В этих условиях споры погибают.

Стерилизация сухим жаром

Сухим жаром стерилизуют в основном стеклянную посуду. При этом пробирки, колбы предварительно закрывают ватны­ми пробками. Чтобы избежать заражения простерилизованных предметов из воздуха, их перед стерилизацией заворачивают в оберточную бумагу, а вынимают только перед ра­ботой.

Пипетки заворачивают полоской бумаги шириной 2,5—3,0 см. Предварительно в конец пипетки, который берут в рот, вклады­вают ватный тампон. Капиллярный конец пипетки кладут на полоску бумаги под углом 45° и заворачивают по спирали.

Чашки Петри заворачивают в бумагу в форме квадрата. Чашку Петри помещают на середину листа, загибают его с двух противоположных сторон кверху, края дважды загибают швом. Два свободных конца загибают вниз. При таком оберты­вании у чашек легко различать верх и низ. Подготовленную таким образом посуду помещают в сушильный шкаф, в котором нагревают ее при температуре 160—170 °С в течение 2 ч. При таком нагревании погибают не только бактерии, но и их споры. Температуру в сушильном шкафу выше 175°С допускать не следует, так как при этом ватные пробки буреют, а бумажная обертка становится ломкой.

Стерилизация текучим паром. Дробная стерилизация или тиндализация

Питательные среды (молоко, солод, желатин), воду, рези­новые трубки и другие предметы, портящиеся от действия сухо­го жара, подвергают стерилизации текучим паром. Стерилиза­цию текучим паром производят в кипятильнике Коха или в автоклаве с открытым вентилем. Воду в них доводят до кипе­ния, и образующийся пар обтекает стерилизуемые объекты. Температура стерилизуемых питательных сред достигает 100°С. Нагревание в течение 30—45 мин приводит к гибели вегета­тивных клеток бактерий, но споры их не погибают. На следую­щий день нагревание повторяют. При этом погибают вегетатив­ные клетки, развившиеся из спор. Для обеспечения полной сте­рильности жидкость оставляют еще на сутки и снова повторяют нагревание. Такую стерилизацию называют дробной или тиндализацией.

Пастеризация

В основе пастеризации лежит нагревание жидкостей до тем­пературы меньше 100°С. Цель её — уничтожение неспороносных бактерий в жидкостях, теряющих питательные свойства при кипячении (молоко, пиво, вино и др.). Осуществляется па­стеризация нагреванием жидкостей при 60 °С в течение 30 минут или при 75^оС в течение 15 минут, или при 80°С в тече­ние 10 минут.

Холодная стерилизация

Органические жидкости, не выносящие нагревания, освобож­дают от бактерий, пропуская через стерильные мелкие пористые фильтры. Эти фильтры назы­вают бактериальными фильтрами. Они задерживают микроорганизмы.

Бактериальные фильтры имеют разные номера. Фильтры № 1 имеют средний диаметр пор 0,3 мкм, они наиболее на­дежны. Фильтры № 5 имеют самые большие отверстия пор, диаметром 1,2 мкм.

Перед употреблением мембранные фильтры стерилизуют ки­пячением. Фильтры помещают в теплую дистиллированную во­ду и кипятят 30 минут, меняя ее 2-3 раза.

Стерилизация в автоклаве паром под давлением

Наиболее падежный и универсальный метод стерилизации питательных сред и материалов — стерилизация их насыщен­ным паром под давлением. Производят ее в автоклаве, в кото­ром стерилизуемые объекты нагревают чистым насыщенным па­ром при давлении выше атмосферного. Когда насыщенный пар встречается с более холодным объектом, он конденсируется, превращаясь в воду. При конденсации выделяется большое количество теплоты, и температура стерилизуемого объекта бы­стро повышается.

Полная стерилизация питатель­ных сред при 120°С и давлении 1 атм обеспечивается нагреванием в течение 20 мин.