Якщо функціональна група, що визначається, основа, тоді

а). при d₁ > d_м

рК_а = рН + lg d - d_м /d₁ - d (1.7 а)

б). при d₁ < d_м

рК_а = рН + lg (1.7 б)

Таким чином, цей метод визначення рК_а складається з вимірювання співвідношення концентрації іона до концентрації нейтральної молекули досліджуємої речовини, що розчинена в серії розчинів з точно відомим значенням рН. Це визначення проводиться при аналітичній довжині хвилі, коли спостерігається найбільша різниця в значеннях оптичної густини іону та нейтральної молекули (наприклад, аналітична довжина хвилі 358 ммк на рис.2).

Рис.2 приклад визначення рК_а спектрофотометричним методом (аналітична довжина хвилі 358 ммк):

1 – крива поглинання аніона (рН = 8);

2 – крива поглинання нейтральної молекули (рН = 2);

3 – крива поглинання аніона і нейтральної молекули (рН = 5,5).

На рис.2 наведені результати визначення рКа для кислоти. На аналітичній довжині хвилі розчин аніона має оптичну гостину 0,700, розчин нейтральної молекули -- 0,105 і розчин суміші (при рН = 5,5) -- 0,395. Таким чином, рівняння 1,6 може бути вирішено для рН = 5,5.