Определение сбраживающей способности дрожжей

С целью выявления сбраживающей способности дрожжей производят высев исследуемых культур на жидкие питательные среды, содержащие не менее 2% глюкозы, находящиеся в пробирках со вкладышами (маленькие запаянные с одного конца трубочки) или в трубках Дунбара. Наличие сбраживающей способности по окончании 24-ой инкубации при комнатной температуре детектируют визуально по присутствию пузырька газа в запаянном конце трубки Дунбара или во вкладыше.

Задание:

1. Приготовить ПС типа Сабуро-бульон (глюкоза – 4%, пептон – 1%), заполнить ею трубки Дунбара или пробирки со вкладышами. Закрыть ватно-марлевыми пробками, простерилизовать.

2. Произвести посев изучаемых дрожжевых культур на жидкую ПС.

3. Определить наличие/отсутствие сбраживающей способность у изучаемых дрожжевых культур.

10.4 Количественный учёт микроорганизмов с помощью счётных камер.

В счётных камерах Горяева можно произвести подсчёт крупных микробных клеток – дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий, спор грибов, некоторых бактерий. Счетная камера представляет собой толстостенное предметное стекло с нанесёнными на нём поперечными прорезами, которые образуют три поперечно расположенные плоские площадки. Средняя площадка продольным прорезом разделена пополам, причем на каждой половине нанесена квадратная сетка (рис. 9, а ). Две боковые площадки расположены на 0,1 мм выше средней (рис. 9, б). Эти площадки служат для притирания покровного стекла к средней площадке.

Сетка разделена на определенное число больших и маленьких квадратов, по-разному сгруппированных.

Сторона квадрата (ABCD, рис. 12, в) равна 1/20 мм, площадь –1/400 мм², высота – 1/10 мм объём– 1/4000 мм³или 1/4000000 см³. Большой квадрат ABCD, состоит из 16 малых квадратиков.

Рис. 12. Счётная камера Горяева: а – вид сверху; б – вид сбоку (h – высота камеры),

в – вид при малом увеличении микроскопа.

Каплю взвеси наносят на сетку камеры и сверху накрывают чистым покровным стеклом. Большими пальцами покровное стекло плотно притирают к боковым площадкам камеры до появления ньютоновских колец.

Камеру с исследуемым материалом помещают на предметный столик микроскопа и микроскопируют с объективом 8^х и 40^х.

Просчитывают количество клеток в пяти больших квадратах, учитывая все клетки, размещенные внутри квадрата и на пограничных линиях.

Находят среднее количество клеток в одном квадрате. Пересчёт на 1 см³ суспензии с учётом разведения производят по формуле:

N = (a · 1000) · K/(h · S),

где N – число клеток в 1 см³ суспензии; а – среднее число клеток в большом квадрате; h – глубина камеры, мм; S – площадь квадрата, мм²; К - разведение исходной суспензии; 1000 – коэффициент пересчёта мм³ в см³.

Задание:

1. Изучить устройство камеры Горяева, притереть покровное стекло до появления ньютоновских колец.

2. Определить титр дрожжевой суспензии прямым счетом в камере Горяева. Рассчитать количество дрожжей в суспензии.