Выделение медиаторов

Для того, чтобы молекулы медиатора попали в синаптическую щель, синаптический пузырек должен сначала слиться с пресинап-тической мембраной в ее активной зоне После этого в пресинапти-ческой мембране образуется увеличивающееся примерно до 50 нм в диаметре отверстие, через которое все содержимое пузырька опорож­няется в щель (рис 6 2) Этот процесс называется экзоцитозом Когда необходимости в выделении медиатора нет, большая часть си-наптических пузырьков бывает прикреплена к цитоскелету специ­альным белком (он называется синапсин), который по своим свойст­вам напоминает сократительный мышечный белок актин

Когда нейрон возбуждается и потенциал действия достигает пресинаптического окончания, в нем открываются потенциалзависимые каналы для ионов кальция Их плотность особенно высока в области активных зон - около 1500/ мкм^: В большинстве нейронов ток ио­нов кальция в нервное окончание наблюдается и при мембранном потенциале покоя, что обусловлено электрохимическим градиентом Но во время деполяризации мембраны ток кальция увеличивается, а на вершине пика потенциала действия он становится максимальным и приблизительно через 0,2 мс после этого происходит выделение медиатора

Роль ионов кальция состоит в том, чтобы преобразовать вызван­ную возбуждением нейрона деполяризацию в неэлектрическую ак­тивность - выделение медиатора. Без входящего тока ионов кальция нейрон фактически лишается своей выходной активности. Кальций нужен для взаимодействия белков мембраны синаптических пузырь­ков - синаптотагмина и синаптобревина с белками плазматической мембраны аксона - синтаксином и неурексином. В результате взаи­модействия этих белков синаптические пузырьки перемещаются к активным зонам и прикрепляются к плазматической мембране. Толь­ко после этого начинается экзоцитоз (рис. 6.3).

Некоторые нейротоксины, например ботулинический, повреждают синаптобревин, что препятствует выделению медиатора - о тяже­лых последствиях ботулизма уже говорилось в предыдущей главе. Ещё один нейротоксин - яд пауков рода Latrodectus связывает другой белок -неурексин, что приводит к быстрому опустошению пузырь­ков с медиатором. После укуса каракурта, одного из представителей этого рода пауков, у человека немеют ноги, его мучает удушье, мыш­цы живота становятся твёрдыми, как доска, возникает нестерпимая боль в животе и груди, наступает сильное психическое возбуждение, страх смерти, а иногда и сама смерть. Американский родственник каракурта - чёрная вдова (black widow) пользуется тем же ядом, что и каракурт, уступая, впрочем, каракурту в убойной силе.

Небольшое количество медиатора выделяется и без возбуждения нейрона, происходит это малыми порциями - квантами, что было впер­вые обнаружено в нервно-мышечном синапсе. В результате выделе­ния одного кванта на мембране концевой пластинки возникает миниа­тюрный подпороговый потенциал величиной около 0,5 -1 мВ. Выяс­нено, что для такой деполяризации концевой пластинки в ней надо открыть минимум 2000 каналов, а чтобы открыть столько каналов, необходимо приблизительно 5000 молекул ацетилхолина, следовательно, квант представляет собой порцию медиатора, содержащуюся всего лишь в одном синаптическом пузырьке. Для возникновения нормаль­ного потенциала концевой пластинки требуется освободить около 150 квантов медиатора, но за очень короткое время - не более 2 мс.

В большинстве синапсов центральной нервной системы после вхождения ионов кальция в пресинаптическое окончание выделяет­ся от 1 до 10 квантов медиатора, поэтому одиночные потенциалы дей­ствия практически всегда оказываются подпороговыми. Количество выделяемого медиатора увеличивается, когда к пресинаптическому окончанию поступает серия высокочастотных потенциалов действия. В этом случае растёт и амплитуда постсинаптического потенциала, т.е. происходит временная суммация.

После высокочастотной стимуляции пресинаптического оконча­ния наблюдается повышение эффективности синаптической переда­чи в течение нескольких минут, а у отдельных нейронов ещё дольше - до часа, когда в ответ на одиночный потенциал действия медитора выделяется больше, чем обычно. Это явление получило название по-сттетанической потенциации. Объясняется оно тем, что при высоко­частотной или тетанической стимуляции растёт концентрация сво­бодного кальция в нервном окончании и им насыщаются буферные системы, прежде всего эндоплазматический ретикулум и митохонд­рии. В связи с этим активируется специализированный фермент: каль-ций-кальмодулин-зависимая протеинкиназа. Этот фермент вызывает повышенное отхождение синаптических пузырьков от цитоскеле-та. Освободившиеся синаптические пузырьки направляются к пре-синаптической мембране и сливаются с ней, после этого происходит экзоцитоз.

Повышение эффективности синаптической передачи является одним из механизмов образования памяти, а накопление ионов каль­ция в пресинаптическом окончании можно рассматривать как один из способов хранения информации о предшествующей высокой ак­тивности нейрона.

6.4. Разные постсинаптические рецепторы: ионотропное и метаботропное управление

Представление о рецепторах сформулировал ещё в конце XIX века знаменитый германский учёный Пауль Эрлих (Erlich P.):«Хи­мические субстанции влияют только на те элементы ткани, с которы­ми они могут связаться. Эта связь должна быть специфичной, т.е. химические группы должны соответствовать друг другу, как ключ и замок». Постсинаптические рецепторы представляют собой транс­мембранные белки, у которых наружная часть узнаёт и связывает молекулы медиатора. Вместе с тем, их можно рассматривать ещё и как эффекторы, управляющие открытием и закрытием хемозависи-мых ионных каналов. Есть два принципиально отличающихся спо­соба управления каналами: ионотропный и метаботропный.

При ионотропном управлении рецептор и канал представляют собой единую макромолекулу. Если к рецептору присоединяется ме­диатор, то конформация всей молекулы изменяется так, что в центре канала образуется пора и через неё проходят ионы. При метаботроп-ном управлении рецепторы не связаны с каналом напрямую и поэто­му присоединение медиатора и открытие канала разделены несколь­кими промежуточными этапами, в которых участвуют вторичные посредники. Первичным посредником является сам медиатор, кото­рый при метаботропном управлении присоединяется к рецептору, действующему на несколько молекул G-белка, который представляет собой длинную извитую аминокислотную цепь, пронизывающие кле­точную мембрану семью своими петлями. Известно около дюжины разновидностей G-белков, все они связаны с нуклеотидом гуанозин-трифосфатом (ГТФ). Присоединение нейротрансмиттера к рецептору вызывает сразу в нескольких связанных с ним молекулах G-белка, превращение бедного энергией предшественника - гуанозиндифос-фата(ГДФ)вГТФ.

Такого рода преобразования, обусловленные присоединением остатка фосфорной кислоты, называются фосфорилированием. Вновь образующаяся связь богата энергией, поэтому молекулы G-белка, в которых произошло превращение ГДФ в ГТФ, становятся активиро­ванными (рис. 6.4). Активация белковых молекул может проявляться в изменении их конформации, а у ферментов она обнаруживается в повышении сродства к субстрату, на который действует фермент.

Приобретённая активность у G-белков направлена на стимуля­цию или подавление активности (в зависимости от типа G-белка) некоторых ферментов (аденилатциклазы, гуанилатциклазы, фосфо-липаз А 2 и С), которые в случае активации вызывают образование вторичных посредников. Конкретный ход дальнейших событий за­висит от типа преобразующего сигнал белка. В случае прямого управ­ления ионными каналами активированная молекула G-белка переме­щается по внутренней поверхности мембраны к ближайшему ионно­му каналу и присоединяется к нему, что приводит к открытию этого канала.При непрямом управлении активированный G-белок исполь­зует одну из систем вторичных посредников, которые либо управля­ют ионными каналами, либо изменяют характер метаболизма - об­менных процессов в клетке, либо вызывают экспрессию определён­ных генов, за которой следует синтез новых белков, что, в конечном счёте, тоже приводит к изменению характера обменных процессов. Из вторичных посредников лучше всего изучен циклический адено-зинмонофосфат (цАМФ), образование которого осуществляется в несколько этапов (рис. 6.5). Активированный G-белок действует на интегральный белок клеточной мембраны - аденилатциклазу, кото­рая является ферментом. Активированная аденилатциклаза вызыва­ет превращение молекул аденозинтрифосфата (АТФ) в циклический аденозинмонофосфат (цАМФ), причём одна молекула аденилатцик-лазы вызывает образование множества молекул цАМФ. Молекулы цАМФ могут свободно диффундировать в цитоплазме, становясь, таким образом, переносчиками полученного сигнала внутри клетки. Там они находят ферменты - цАМФ-зависимые протеинкиназы и активирует их. Протеинкиназы стимулируют определённые биохи­мические реакции - характер обменных процессов направленно из­меняется.

Следует обратить внимание на усиление слабого синаптического сигнала при такой последовательности событий. Присоединение одной молекулы нейротрансмиттера к рецептору сопровождается активацией нескольких молекул G-белков. Каждая молекула G-белка может активировать несколько молекул аденилатциклазы. Каждая молекула аденилатциклазы вызывает образование множества моле­кул цАМФ. По такому же принципу, но с участием других типов G-белка активируются другие системы известных вторичных посред­ников (рис. 6.6). Некоторые вторичные посредники могут диффун­дировать через мембрану клетки и оказывать действие на соседние нейроны, в том числе и на пресинаптический (рис. 6.7).

Таким, образом, ионотропное управление является непосредст­венным: лишь только медиатор присоединится к рецептору - откры­вается ионный канал, причём всё происходит очень быстро, в тече­ние тысячных долей секунды. При метаботропном управлении ответ на присоединение медиатора непрямой, он требует участия преобра­зующих белков и включает активацию вторичных посредников, а поэтому и появляется значительно позже, чем ионотропный: спустя секунды, а иногда и минуты. Зато при метаботропном управлении обусловленные действием медиатора изменения сохраняются доль­ше, чем при ионотропном управлении. Ионотропным управлением чаще пользуются низкомолекулярные медиаторы, а нейропептиды чаще активируют системы вторичных посредников, однако эти раз­личия не абсолютны. К ионотропным рецепторам относятся Н-холи-норецепторы, один тип рецепторов для ГАМК, два типа рецепторов для глутамата, рецепторы глицина и серотонина. К метаботропным принадлежат рецепторы нейропептидов, М-холинорецепторы, аль­фа- и бета-адренорецепторы, по одному типу рецепторов для ГАМК, глутамата и серотонина, а также обонятельные рецепторы.

Ещё один вид рецепторов находится не на постсинаптической, а на пресинаптической
мембране - это ауторецепторы. Они связаны с G-белком пресинаптической мембраны, их функция состоит в регуля

ции количества молекул медиатора в синаптической щели. Одни ауто-рецепторы связываются с медиатором, если его концентрация стано­вится чрезмерной, другие - если недостаточной. После этого меняет­ся интенсивность выделения медиатора из пресинаптического окон­чания: уменьшается в первом случае и увеличивается - во втором. Ауторецепторы являются важным звеном обратной связи, с помощью которой регулируется стабильность синаптической передачи.