Доказательства существования стадии ДНК-интермедиата в цикле репродукции ретровирусов

В лаборатории Темина было поcтулировано что вирус Рауса репродуцируется проходя видимо стадию ДНК- интермедиата, но по поскольку геном вируса представлен РНК, то этот ДНК- интермедиат должен синтезироваться с использованием матрицы РНК с образованием продукта ДНК.

В 60-х гг. провели эксперимент с антибиотиком актиномицином Д (способен ингибировать синтез РНК на матрице ДНК, но не блокирует синтез РНК на матрице РНК).

3 случая (на среде с актиномицином Д): л.11.рис.(4)

1. норм. к-ки =>останавливался синтез РНК.

2. клетка с РНК вирусом => вирусная РНК синтезируется, а клеточная нет.

3. клетка с вирусом саркомы Рауса = > блокируется весь синтез.

Предположили, что вирус саркомы Рауса проходит промежуточную стадию синтеза ДНК, с которой идёт синтез РНК, который потом и блокируется.

Провели ещё один эксперимент, который доказывал это предположение: л.11.рис.(6)

1. первая чашка – контроль, к клеткам находящимся в стационарой фазе добавляли сыворотку, и клетки нормально росли.

2. нормальные клетки, находящиеся в стационарной фазе заражали вирусом саркомы Рауса. При добавлении в среду сыворотки, клетки трансформировались и продуцировали вирусные частицы.

3. нормальные клетки, находящиеся в стационарной фазе заражали вирусом саркомы Рауса и ещё добавляли ингибитор синтеза ДНК. Вирус не продуцировался. Если удалить ингибитор и в среду добавить сыворотку, то…….