Методические указания к лабораторным работам

№1: Обнаружение в моче глюкозы.

№2: Анализ содержания в моче кетоновых тел. Оценка углеводного обмена по готовым биохимическим показателям крови и мочи.

Работа № 1: Полуколичественное определение глюкозы в моче.

Принцип метода: основан на реакции Фелинга – взаимодействия глюкозы со смесью сернокислой меди, цитрата натрия и углекислого натрия, при нагревании развивается окраска от синей до кирпично-красной, в зависимости от концентрации глюкозы.

Клинико-диагностическое значение. Глюкозурия у больных сахарным диабетом свидетельствует о декомпенсации течения болезни о содержании глюкозы в крови выше сахарного порога (9,5 – 10,5 ммоль/л). Такое состояние болезни всегда опасно развитием острых и хронических осложнений.

Ход работы.

В три чистые пробирки - № 1, № 2, № 3 отмерить по 5 мл. реакционной смеси - Фелинга и по 10 капель мочи каждого больного. Все пробирки нагреть над пламенем спиртовки до кипения и кипятить 10 секунд, затем охладить в течение 5 минут и по развившейся окраске определить концентрацию глюкозы (табл. 6). Результаты внести в сводную таблицу для общего заключения, по результатам всех трех работ, выполненных на занятии.

Таблица 6. Определение концентрации глюкозы в моче

Окраска	Содержание глюкозы %
Зеленая	0,05 – 0,5
Желтая	0,5 – 1,0
Темно-желтая	1,0 – 2,0
Кирпично-красная	Более 2,0

Полуколичественный экспресс - анализ содержания глюкозы в моче с использованием диагностических тест-полосок «Глюкозо-Уротест»

Принцип метода. Тест-полоска представляет собой полоску полистерола с нанесенным на неё аналитическим составом в виде цветного квадратика, который при взаимодействии с раствором глюкозы, в концентрации от 0,1% до 20%, изменяет свой цвет вследствие окисления глюкозы и восстановления красителя, например, о-толидина. Реакция идет в два этапа при участии двух ферментов – глюкозооксидазы и пероксидазы.

Высокая специфичность и чувствительность этого метода, а также простота и быстрота выполнения позволяют широко применять его как предварительный тест при массовом обследовании больных и населения. Кроме того, он позволяет самому больному следить за содержанием глюкозы в моче и степенью компенсации диабета.

Ход работы. Тест-полоски погрузить на 1 – 2 секунды в пробы мочи больных, излишек мочи удалить с полосок о край сосуда, выдержать 1 – 3 минуты на воздухе, и по цветной шкале определить наличие или примерную концентрацию глюкозы в моче больных.

Результаты внести в сводную таблицу.

Работа № 2: Полуколичественный экспресс- анализ содержания кетоновых тел в моче.

Метод основан на реакции с нитропруссидом натрия, который при взаимодействии с ацетоном и ацетоуксусной кислотой в щелочной среде образует продукты реакции фиолетового цвета.

Клинико-диагностическое значение. Повышение концентрации кетоновых тел в крови и моче больных сахарным диабетом свидетельствует о декомпенсированном состоянии болезни, при котором может развиться кетоацидотическая кома и летальный исход.

Ход работы: На фильтровальную бумагу поместить 3 таблетки или тест-полоски, содержащие сухие смеси сернокислого аммония, углекислого натрия и нитропруссида натрия. На каждую из них капнуть мочу одного больного, через 2 мин. сравнить окраски с цветной шкалой. Если окраска не развилась – кетоновых тел в моче нет. При наличии кетоновых тел развивается фиолетовая окраска различных оттенков в зависимости от концентрации - от 0,3 до 15 ммоль/л. Результаты анализа внести в сводную таблицу 7.

Таблица 7.. Сводная таблица биохимических показателей, полученных в ходе исследовании больных

Больной №	Исследуемый материал	Биохимические показатели.
ГЛЮКОЗА	КЕТОНОВЫЕ ТЕЛА	АЗОТ	ХС	НвАс %	рН
1.	Кровь	16 мМ/л	1,6мМ/л	­	­	8,0	7,4
Моча			­	-	-	6,0
2.	Кровь	14 мМ/л	5,5 мМ/л	­	­	10,0	7,32
Моча			­	-	-	5,5
3.	Кровь	6,4 мМ/л	1,5 мМ/л	N	­	5,0	7,4
Моча			N	-	-	6,0

Сделайте выводы о состоянии каждого больного: вида диабета и степени его компенсации.