Лабораторная работа. Биохимическая диагностика сахарного диабета

В полученной задаче определить глюкозу в крови и построить сахарную кривую.

На основании полученных результатов сделать вывод о наличии или отсутствии сахарного диабета.

Определение глюкозы крови глюкозооксидазным методом.

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками
	2.	Пипетки на 1 мл и 0,2 мл
	3.	КФК
	4.	Кюветы на 3 мм
	5.	Иммунологические планшеты
	6.	Диагностические тест-полоски
Реактивы:	1.	Рабочий раствор
	2.	Стандартный раствор глюкозы
	3.	Дистиллированная вода
	4.	Сыворотка крови
	5.	Моча

Принцип метода. Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет хромоген хлоркрезол с образованием окрашенного продукта. Обе реакции протекают одновременно.

Ход работы. Внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

Реактивы (мл)	Опытная проба	Стандартная проба	Контроль
Рабочий раствор	1,0	1,0	1,0
Сыворотка	0,2	-	-
Стандартный р-р глюкозы (10ммоль/л)	-	0,2	-
Дистиллированная вода	-	-	0,2

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 15 мин при 37^ОС, затем интенсивно встряхнуть. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 490 нм в кювете толщиной 3 мм против контроля. Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:

С = (Е_О/Е_С) х 10;

где: С – концентрация глюкозы в ммоль/л.

Е_О – оптическая плотность опытной пробы.

Е_С – оптическая плотность стандартной пробы.

10 – концентрация глюкозы в стандартной пробе, ммоль/л.

Норма глюкозы крови утром натощак – 3,3-5,5 ммоль/л.

Определение глюкозы в моче

В лунки иммунологического планшета вносят 0,05 мл мочи и 0,2 мл рабочего реактива.

Отсутствие развития окраски в течение 2 мин свидетельствует об отсутствии глюкозы в данной пробе. Пробы мочи, вызывающие покраснение реакционной смеси, считают положительными.

Определение глюкозы в моче с использованием глюкотеста

Глюкотест, предназначен для качественного экспресс-анализа глюкозы в моче.

Тест полоску погружают в мочу на 1-2 секунды и вынимают, оставшуюся на полоске мочу удаляют о край сосуда и выдерживают на воздухе от 1 до 3 минут. Визуально определяют цвет. Переход светло-бежевого в синий, светло-розового в красный, желтого в зеленый учитывают как положительный результат. Положительные пробы мочи направляются на количественное исследование.

Чувствительность составляет 1,4 – 5,6 ммоль/л или не более 0,1% массовой доли глюкозы в исследуемой моче.