Исходный уровень знаний

1. Структуры белков. Свойства белков и аминокислот.

2. Ферменты. Энзимопатии.

3. Этапы катаболизма на примере белков.

Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

- переваривание белков в желудке: пептидазы желудка, их характеристика. Значение ионов водорода в переваривании белков в желудке. Регуляция секреции желудочного сока;

- характеристика ферментов сока поджелудочной железы. Регуляция секреции железы;

- ферменты кишечного сока;

- патология переваривания белков: острый панкреатит, его диагностика и лечение; синдром нарушенного переваривания и всасывания белков;

- источники и пути использования аминокислот в организме;

- декарбоксилирование аминокислот: ход реакции, продукты и их использование;

- декарбоксилирование глутамата, серина, цистеина, лизина, орнитина, триптофана, гистидина;

- значение реакции декарбоксилирования в образовании катехола-минов;

- переаминирование аминокислот, ход реакций, значение, регуляция;

- значение аминотрансфераз в диагностике болезней;

- дезаминирование аминокислот, виды дезаминирования, значение;

- окислительное дезаминирование глутаминовой кислоты, значение, регуляция;

- непрямое дезаминирование аминокислот, значение;

- восстановительное аминирование: ход реакции, ферменты, коферменты, значение для организма;

- обмен аминокислот по радикалу;

- источники аммиака и причины его токсичности аммиака;

- способы обезвреживания аммиака в клетках; транспортные формы аммиака в крови;

- синтез мочевины: ход реакций, регуляция, значение, связь с циклом Кребса;

- синтез креатина: ход реакций, значение креатинфосфата, метаболизм;

- диагностическое значение креатинкиназы и креатинина, клиренс по креатинину;

- обмен отдельных аминокислот.

Лабораторная работа. Биохимическая диагностика заболеваний печени

Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ)

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Пипетки на 0,1 мл, 1 мл и 5 мл.
	3.	КФК.
	4.	Кюветы на 5 мм.
	5.	Термостат.
Реактивы:	1.	Буферно-субстратная смесь для АлАТ.
	2.	Буферно-субстратная смесь для АсАТ.
	3.	Раствор динитрофенилгидразина..
	4.	0,4Н NaOH.
	5.	Дистиллированная вода.
	6.	Сыворотка крови.

Принцип метода. Метод основан на фотометрическом определении динитрофенилгидразонов пирувата, образующегося в результате ферментативной реакции под действием АлАТ. При действии АсАТ образуется оксалоацетат, переходящий в пируват самопроизвольно. Концентрация динитрофенилгидразонов пирувата служит мерой активности обоих ферментов.

Ход работы.

1. Определение активности АсАТ. Пробирку с 0,5 мл буферно-субстратной смеси для АсАТ помещают в термостат при 37^ОС на 5 мин. Затем добавляют 0,1 мл сыворотки и оставляют в термостате на 30 мин. Когда время инкубации подходит к концу, начинают готовить контроль, в котором 0,1 мл сыворотки смешивают с 0,5 мл буферно-субстратной смеси. Сразу же в опытную и контрольную пробы добавляют 0,5 мл р-ра динитрофенилгидразина и оставляют пробы на 10 мин при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 мл 0,4Н р-ра едкого натра и через 10 мин колориметрируют пробы при сине-зеленом светофильтре в кювете толщиной 1 см против воды.

2. Определение активности АлАТ. Проводят точно так же, как и определение активности АсАТ, только берут субстратно-буферную смесь для АлАТ.

Расчет активности АсАТ и АлАТ. Разность между оптическими плотностями контрольной и опытной проб указывает изменение оптической плотности в результате прошедшей ферментативной реакции. По этой разности определяют активность АсАТ и АлАТ по калибровочному графику. Активность ферментов выражают в мкмолях пирувата, образовавшегося за час инкубации на 1 мл сыворотки.

Норма активности АлАТ – 0,1-0,7 мкмоль/мл за 1 час, АсАТ – 0,1-0,5 мкмоль/мл за 1 час.

Диагностическое значение определения активности аминотрансфераз

Повышение активности аминотрансфераз в сыворотке отмечается при поражении органов и тканей, богатых данными ферментами. При инфаркте миокарда наблюдается повышение активности АсАТ (в 2-20 раз). Увеличение активности начинается через 6-12 часов и возвращается к исходному уровню через 4-5 дней. При стенокардии активность АсАТ, как правило, остается в норме. При заболеваниях печени в первую очередь и наиболее значительно по сравнению с АсАТ изменяется активность АлАТ. При инфекционном гепатите максимум повышения отмечается на 6-10 день заболевания и постепенно возвращается к норме к 15-20 дню. Повышение активности АлАТ отмечается и при безжелтушной форме болезни Боткина. Механические желтухи, холангиты и ряд других заболеваний печени обычно не сопровождаются значительным повышением активности АсАТ и АлАТ и их соотношения (коэффициент де Ритиса). В норме этот коэффициент = 1,33±0,42. При паренхиматозных заболеваниях печени происходит снижение коэффициента, а при остром инфаркте миокарда он резко возрастает.