Хід роботи. 1. Підрахунок еритроцитів

1. Підрахунок еритроцитів. У чисту суху пробірку відмірюють піпеткою 4 мл 3%-го розчину хлориду натрію. Скарифікатором проколюють палець людини, додержуючи правил асептики та антисептики. В піпетку від гемометра набирають 20 мкл крові (до позначки на піпетці) і вносять її у розчин в пробірці, кілька разів промивають розчином піпетку (втягуючи розчин у піпетку і видуваючи його у пробірку). Перемішують рідину в пробірці, постукуючи пальцем по її дну, щоб еритроцити, розподілилися в рідині рівномірно. Кров розведена у 200 разів.

Потім заповняють камеру суспензією еритроцитів. Для цього піпеткою або скляною паличкою наносять краплю розведеної крові на середню пластинку біля краю накривного скельця. Після заповнення камери вичікують 1-2 хв. (доки осядуть форменні елементи) і починають підрахунок при малому збільшенні мікроскопа в затемненому полі зору (з прикритою діафрагмою і трохи опущеним конденсором мікроскопа. Рахують еритроцити у 5 великих або 80 малих, квадратах (5Х16 = 80 малих квадратів), розташованих по діагоналі, оскільки розподіл кліток у камері може бути нерівномірним. Для цього під мікроскопом відшукують верхній великий квадрат (поділений на 16 малих), підраховують кількість еритроцитів у ньому, потім посувають камеру по діагоналі вниз і направо, до наступного квадрата і т. д.

Підлягають підрахунку всі еритроцитів межах маленького квадрата, а також ті, що знаходяться на лівій і верхній лініях його або дотикаються до них з обох боків. Еритроцити на правій і нижній лініях і ті, що дотикаються до них, не враховуються -це буде зроблено в наступному квадраті.

Кількість еритроцитів у 1 мкл крові розраховують за формулою:

Е=А х 4000 х В/Б

де Е — кількість еритроцитів в 1 мкл крові; А — кількість еритроцитів, виявлених у певній кількості малих квадратів; Б — кількість малих квадратів, у яких пораховано еритроцити; В — ступінь розведення крові; 4000 — множник для перерахунку кількості еритроцитів на 1 мкл. Об'єм малого квадрата дорівнює 1/4000 мм³ або 1/4000 мкл. Помноживши його на 4000, зводимо до об'єму 1 мм³ або 1 мкл крові.

Приклад розрахунку: у 5 великих (80 малих) квадратах нараховано 448 еритроцитів, кров розведена у 200 разів. Число еритроцитів дорівнює:

= 4,48 млн/мкл, або 4,48 Т/л (4,48 х 10¹²/л тера на літр).

2. Підрахунок лейкоцитів. У пробірку вносять 0,4 мл 4 %-го розчину оцтової кислоти, підфарбованої метиленовим синім, додають (піпеткою від гемометра) 20 мкл крові й добре перемішують. Одержують розведення крові у 20 разів. Заповнюють камеру, як це робили при підрахунку еритроцитів. Оскільки лейкоцитів менше, ніж еритроцитів, то для точності підрахунок провадять у 100 великих квадратах (які не розграфлені на малі), що відповідає 1600 малим квадратам. Розрахунок роблять за формулою:

де А - полічена кількість лейкоцитів; Б - кількість малих квадратів, в яких підрахували еритроцити; В - ступінь розведення крові; 4000 — множник для перерахунку кількості лейкоцитів на 1 мкл; Л - шукана кількість лейкоцитів у крові.

Приклад розрахунку: у 100 великих квадратах (1600 малих) підраховано 148 лейкоцитів, кров розведена у 20 разів. Кількість лейкоцитів дорівнює:

в 1 мкл.

Для перерахунку кількості лейкоцитів у крові в одиницях СІ число їх в 1 мкл. помножують на 0,001. Приклад: 7400 х 0,001=7,4 Г/л (7,4 х 10⁹/л, гіга на літр).

Оформити протокол. Записати результати підрахунку. Зарисувати фрагмент сітки камери Горяєва з великими і малими квадратами. Зробити висновки про відповідність підрахованих формених елементів крові.

Контрольні запитання і завдання:

· Схарактеризувати камеру Горяєва.

· Що таке пробірковий метод розведення крові для підрахунку форменних елементів?

· Техніка підрахунку еритроцитів, лейкоцитів.

· В яких одиницях вимірюють кількість еритроцитів і лейкоцитів крові?