Робота 1. Підрахунок еритроцитів і лейкоцитів крові

Підрахунок еритроцитів і лейкоцитів можна провадити візуально, користуючись мікроскопом і спеціальною лічильною камерою, а також за допомогою електроеритрогемометра або фотоелектроколориметра. Існують також автоматичні електронні лічильники, які дають змогу виконувати одночасно дослідження численних проб крові.

Лічильна камера складається з товстого прямокутного (предметного) скла, в центральній частині якого нанесено (вигравірувано) дві сітки Горяєва, розмежовані глибокою поперечною канавкою. Збоку від сіток розташовані скляні прямокутні пластинки, до яких притирається шліфоване накривне скельце.

Сітка Горяєва складається з 225 великих квадратів (15 х 15). Частину з них розділено вертикально і горизонтально на 16 малих квадратів, які чергуються з квадратами, що поділені тільки горизонтальними або вертикальними лініями, і з чистими квадратами, без ліній. Глибина камери дорівнює 1/10 мм, бік малого квадрата — 1/20 мм, отже, об'єм одного малого квадрата становить 1/4000 мм³ (1/20 х 1/20 х 1/10 = 1/4000). Це важливо пам'ятати для правильного розрахунку числа еритроцитів чи інших формених елементів.

Перед тим, як заповнити камеру, її миють і висушують, так само як і накривне скельце. Накривне скельце притирають до камери так, щоб з'явилися райдужні кільця (ньютонові). Лише за цих умов витримуватимуться необхідна висота і правильний об'єм камери. Щоб ознайомитися з сіткою Горяєва необхідно помістити її під мікроскоп і роздивитися спершу під малим, потім під великим збільшенням.

При підрахунку форменних елементів кров спочатку розводять, щоб зменшити число клітин, які підраховують. Для підрахунку еритроцитів кров розводять у 200 разів, лейкоцити — у 20 разів.

Для розведення крові можна скористатися змішувачами-меланжерами. Змішувач-меланжер являє собою піпетку з ампулоподібним розширенням, в якому знаходиться бусинка (у змішувачі для еритроцитів — червона, для лейкоцитів — біла). Бусинка сприяє кращому перемішуванню крові з рідиною, якою її розводять. На капілярі змішувача нанесено дві позначки: 0,5 і 1,0. Третя позначка знаходиться за ампулоподібним розширенням, на змішувачі для еритроцитів позначка 101, для лейкоцитів – 11. На короткий кінець змішувача натягують гумову трубку, кінець якої беруть ротом і насмоктують у капіляр кров і розріджувач.

Для підрахунку форменних елементів доцільно застосовувати зручний і досить точний метод розведення крові у пробірках - пробірковий метод. При цьому рідини для розведення крові точно відмірюють піпеткою в пробірки, туди ж вносять точно виміряну кількість крові (20 мкл).

Для розведення крові, при підрахунку еритроцитів застосовують гіпертонічний (3%-й) розчин хлориду натрію, в якому еритроцити зморщуються; при підрахунку лейкоцитів кров розводять 5 %-м розчином оцтової кислоти, підфарбованим метиленовим синім або іншим ядерним барвником. Кислота руйнує оболонки еритроцитів, вони стають невидимими і не заважають підрахунку лейкоцитів. Підфарбовані ядра лейкоцитів легше помітити.

Мета і завдання. Ознайомитися з методами підрахунку еритроцитів, лейкоцитів. Визначити вміст їх у крові.

Матеріали та обладнання: мікроскоп, лічильна камера Горяєва, пробірки (краще центрифужні), піпетки, З%-й розчин хлориду натрію, 5%-й розчин оцтової кислоти, підфарбований метиленовим синім або генціанвіолетом, стерильний скарифікатор, спирт, ефір, настойка йоду.

Об'єкт дослідження: людина або тварина.

Питання для теоретичної підготовки. Еритроцити, їхня будова, роль у життєдіяльності організму. Вплив різних факторів на кількість еритроцитів у крові. Анемії, еритроцитози. Лейкоцити, їхні функції. Лейкоцитози і лейкопенії. Класифікація лейкоцитів. Роль окремих груп лейкоцитів у життєдіяльності організму. Фагоцитоз, його біологічне значення. Тромбоцити, їхня роль в організмі.