Количественное определение ферментативной активности

Определить количественное содержание фермента в биологических объектах достаточно трудно, т.к. он присутствует в тканях в ничтожно малых концентрациях. Поэтому о количестве фермента судят по скорости катализируемой им реакции в стандартных условиях (t = 25°С, оптимальное значение рН, при полном насыщении фермента субстратом), и выражают в условных единицах.

За единицу активности фермента (Е – рус./нем. или U – англ./исп.) принимают такое количество фермента, которое в стандартных условиях катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту (1 мкмоль/мин). Эта стандартная международная единица выражения количества фермента и его активности введена в 1962 г. Международным биохимическим союзом. В Международной системе единиц Си (1972 г.) предложена, вместо старой безымянной единицы ферментативной активности (Е или U), новая единица ферментативной активности – катал. 1 катал – это количество фермента, обеспечивающее превращение 1 моля субстрата в 1 секунду в стандартных условиях. Поскольку реакции идут гораздо с меньшей скоростью, то активность выражают в микро-, нано- и пикокаталах. 1Е = 16,67 нкат.

Для характеристики активности ферментов на практике часто используют следующие понятия:

1. Удельная активность – это число единиц ферментативной активности на 1 мг фермента, т.е. число мкмолей субстрата, превращаемое в 1 мин /1 мг фермента. Удельная активность выражается также числом каталов на 1 кг фермента (кат/кг);

2. Молярная активность – выражается в каталах на 1 моль фермента;

3. Молекулярная активность – это число молекул субстрата, превращенное в 1 мин 1 молекулой фермента. Например, молекулярная активность каталазы = 5 мин;

4. Концентрация фермента – выражается в единицах ферментативной активности Е на 1 мл раствора.