Аппарат для перегонки с водяным паром, снабженный водо­отделителем. 3 страница

С ₂ Н ₅ ОН + ССl ₃ СООН + KNO ₂ ---> C ₂ H ₅ ONO + CC1 ₃ COOK + Н ₂ О.

Образовавшийся этилнитрит, который находится над жидкостью в газообраз­ном состоянии, вводят в газовый хроматограф и производят хроматографирование.

Условия хроматографирования:

хроматограф, снабженный катарометром (или пламенно-ионизационным детектором);

металлическая колонка длиной 100 см, диаметром 0.6 см;

твердый носитель: сферохром, хезасорб или другие носители;

неподвижная жидкая фаза: полиэтиленгликоль (мол. масса 1000—1500), нанесенный на твердый носитель в количестве 12 %;

температура термостатов колонки и детектора 75°С, темпера­тура дозатора комнатная;

газ-носитель: азот, пропускаемый колонку хромато­графа со скоростью 50—60 мл/мин;

ток детектора 60—100 мА;

скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч.

Методика обнаружения спирта этилового в напитках и ра­створах. Во флакон из-под пенициллина вносят 0,5 мл 50%-го раствора трихлоруксусной кислоты и 0,5 мл водного раствора эталонного вещества (95%-го этилового спирта, разбавленного водой с таким расчетом, чтобы концентрация его составляла 3— 4%о)- Флакон закрывают резиновой пробкой, которую закреп­ляют специальным приспособлением (фиксатором). Затем с по­мощью шприца через резиновую пробку во флакон вводят 0,25 мл 30 %-го раствора нитрита натрия. Содержимое флакона в течение 1 мин хорошо взбалтывают и с помощью другого сухого шприца набирают 3 мл газообразной фазы, находящейся над жидкостью. Эту газообразную фазу, содержащую этилнитрит, вводят в доза­тор хроматографа и производят хроматографирование. При этом записывают время удерживания этилнитрита.

После окончания хроматографирования эталонного вещества производят точно такой же опыт с исследуемым раствором, в ко­тором предполагается наличие этилового спирта.

Совпадение времени удерживания вещества в обеих пробах (в пробе с эталонным и исследуемым веществом) указывает на идентичность этих веществ.

Методика обнаружения этилового спирта в крови и моче. Ме­тодика обнаружения этилового спирта в крови и моче аналогична методике обнаружения этого спирта в напитках и растворах. Сна­чала производят хроматографирование и определение времени удерживания этилового спирта, являющегося эталонным веще­ством. Это определение производят так, как указано при описании методики определения этого спирта в напитках и растворах. Затем приступают к определению этилового спирта в крови или в моче.

Во флакон из-под пенициллина вносят 0,5 мл исследуемой крови или мочи и 0,5 мл 50 %-го раствора трихлоруксусной кис­лоты. Флакон закрывают резиновой пробкой, которую закреп­ляют специальным фиксатором. После этого во флакон через резиновую пробку с помощью шприца вводят 0,25 мл 30%-го раствора нитрита натрия. Содержимое флакона хорошо взбалтывают в течение одной минуты. Затем из флакона другим шприцем набирают 3 мл газообразной фазы, которую вводят в дозатор хро­матографа и хроматографируют. Если совпадает время удержи­вания эталонного вещества и вещества, содержащегося в крови или в моче, делают вывод о наличии этилового спирта в иссле­дуемых биологических жидкостях.

При обнаружении этилового спирта в моче или в крови мето­дом газожидкостной хроматографии производят количественное определение этого спирта в указанных объектах.

6.4.4.3. Количественное определение спирта этилового в крови и моче методом газожидкостной хроматографии

Для количественного определения спирта этилового в крови и моче применяют метод внутреннего стандарта, как один из методов газожидкостной хроматографии. Согласно этому методу, к крови или к моче, в которых определяют количественное содер­жание спирта этилового, прибавляют внутренний стандарт. В ка­честве внутреннего стандарта применяют спирт пропиловый. Содержащийся в крови или моче спирт этиловый (т. кип. 78 °С), а также пропиловый (т. кип. 97.5 °С), прибавленный в ка­честве внутреннего стандарта, переводят в более летучие соеди­нения (в этилнитрит с т. кип. 17 °С и пропилнитрит с т. кип. 46— 48 °С). Смесь этилнитрита и пропилнитрита вводят в дозатор хроматографа и проводят хроматографирование. При этом на хроматограмме обнаруживаются два пика, один из которых соответ­ствует спирту этиловому (этилнитрит), а второй — спирту пропиловому (пропилнитрит). Затем рассчитывают отношение площа­ди или высоты пика спирта этилового (этилнитрит) к площади или высоте пика внутреннего стандарта — спирта пропилового (пропилнитрит).

Расчет количественного содержания спирта этилового в крови или в моче производят по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. Сначала готовят серию стандартных растворов, содержащих 2, 3, 4 и 5 %о спирта этило­вого, и раствор внутреннего стандарта, содержащий 4 %₀ спирта пропилового. В несколько флаконов из-под пенициллина вносят по 2 мл раствора, содержащего по 4 %₀ спирта пропилового. В каждый флакон прибавляют по 2 мл раствора спирта этилового различной концентрации (2, 3, 4 и 5%о). Содержимое флаконов хорошо перемешивают, а затем берут по 1 мл смеси спиртов из каждого флакона и переносят в другие флаконы из-под пенициллина. В каждый флакон прибавляют по 0.5 мл 50 % раствора кислоты трихлоруксусной. Флаконы закрывают резиновыми пробками, которые закрепляют фиксаторами. Затем с помощью шприца через резиновую пробку во флаконы вносят по 0.25 мл 30 % раствора натрия нитрита. Содержимое фла­конов взбалтывают в течение одной минуты. После этого с по­мощью другого сухого шприца из флаконов отбирают по 3 мл газообразной фазы, которую вводят в дозатор хроматографа, и хроматографируют.

Условия хроматографирования указаны выше при описании способа обнаружения спирта этилового в напитках и растворах.

На хроматограммах измеряют площадь или высоту каждого пика. Затем находят отношение площади или высоты пика спирта эти­лового (этилнитрит) к площади или высоте пика внут­реннего стандарта (пропилнитрита). Учитывая, что при этом для разных концентраций спирта этилового получаются величины, незначительно отличающиеся друг от друга, их умножают на 100 и результаты умножения наносят на ось ординат калибровоч­ного графика. На ось абсцисс калибровочного графика наносят значение концентраций спирта этилового (в %о). Находят точки пересечения линий перпендикуляров от каждой концентрации этилового спирта и соответствующей ему площади или высоты пика. По найденным точкам пересечения проводят прямую которые максимально проходят через эти точки. Полученная кривая служит калибровочным графиком, используемый для расчет количественного содержания этилового спирта в объектах исследования.

6.4.4.4. Методика о пределение количества спирта этилового в крови и моче.

Во флакон из-под пенициллина вносят 2 мл раствора внутреннего стандарта (спирта пропилового, концентрация которого составляет 4%), прибавляют 2 мл крови или мочи, подлежащей исследованию на наличие спирта этилового. Содержимое флакона хорошо взбал­тывают, а затем 1 мл жидкости (смеси крови или мочи с внут­ренним стандартом) переносят в другой флакон из-под пеницил­лина и прибавляют 0.5 мл 50 % раствора кислоты трихлоруксусной. Флакон закрывают резиновой пробкой, которую закреп­ляют фиксатором. При помощи шприца через пробку во флакон вносят 0.25 мл 30% раствора натрия нитрита. Содержимое флакона взбалтывают в течение одной минуты. Затем при по­мощи другого сухого шприца отбирают из флакона 3 мл газо­образной фазы, которую переносят в дозатор хроматографа, и проводят хроматографирование.

На хроматограмме измеряют площади или высоты пиков и рассчитывают отношение площади или высоты пика спирта этилового к площади или высоте пика внутреннего стандарта. На основании этого отношения, умноженного на 1 00, по калибровоч­ному графику рассчитывают содержание спирта этилового в кро­ви или в моче (в %).

При определении спирта этилового в крови найденную по калибровочному графику концентрацию спирта умножают на 0.95, а найденную концентрацию спирта в моче умножают на 1.05.

6.4.5. СПИРТ ИЗОАМИЛОВЫЙ

(СН₃)₂—СН—СН₂—СН₂—ОН

Спирт изоамиловый (СН₃)₂—СН—СН₂—СН₂—ОН (2-метил-бутанол-4 или изобутилкарбинол) представляет собой оптически неактивную жидкость (т. кип. 132.1 °С, пл. 0.814 г/см³ при 20 °С), имеющую неприятный запах.

Спирт изоамиловый (2-метилбутанол-4) является главной со­ставной частью сивушных масел. В состав сивушных масел входят также оптически активный спирт изоамиловый СН₃—СН₂—СН (СН₃)—СН₂—ОН (2-метилбутанол-1), спирт изобутиловый и нормальный спирта пропиловый. Кроме этих спиртов в сивушных маслах в незначительных количествах содержатся жирные кислоты, их эфиры и фурфурол. Наличием 2-метилбутанола-4 в сивушных маслах объясняется его резкий неприятный запах и высокая токсичность. Спирт изоамиловый (2-метилбутанол-4) является побочным продуктом спиртового брожения угле­водов, содержащихся в свекле, картофеле, фруктах, зернах пше­ницы, ржи, ячменя и других сельскохозяйственных культурах.

Основным продуктом спиртового брожения является спирт этиловый, содержащий определенное количество сивушных масел. Однако при спиртовом брожении сивушные масла образуются не за счет углеводов, а за счет аминокислот, являющихся продук­тами гидролиза белков. Так, в условиях спиртового брожения спирт изоамиловый (2-метилбутанол-4) образуется из лейцина, а оптически активный спирт изоамиловый (2-метилбутанол-1) — из изолейцина. Для освобождения от сивушных масел спирта-сырца, полученного при спиртовом брожении, производят ректи­фикацию этого спирта. Ниже будет рассмотрено применение и действие на организм только 2-метилбутанола-4.

Применение. Действие на организм. Спирт изоамиловый при­меняется в промышленности как растворитель, а также исполь­зуется для приготовления эссенций, имеющих приятный фрукто­вый запах. Некоторые из этих эссенций применяются в парфю­мерии. Спирт изоамиловый спирт используется для получения амилаце­тата, применяемого для приготовления нитроцеллюлозных лаков. Этот спирт используется для получения амилнитрита, нашедшего применение в медицине,

Спирт изоамиловый спирт в 10—12 раз токсичнее, чем этиловый. Он действует на центральную нервную систему, обладает нарко­тическими свойствами. При приеме спирта изоамилового появля­ется головная боль, тошнота, рвота. Симптомы отравления про­являются уже после приема внутрь 0.5 г спирта изоамилового. Смерть может наступить после приема внутрь 10—15 г этого спирта. Отмечены случаи смертельных отравлений самогоном и другими спиртоводочными изделиями кустарного производства, которые содержат спирт изоамиловый и другие компоненты си­вушных масел.

Метаболизм. Часть дозы спирта изоамилового, поступившего в организм, превращается в альдегид кислоты изовалериановой, а затем в изовалериановую кислоту. Некоторое количество не­измененного спирта изоамилового и указанных выше метаболи­тов выделяются из организма с мочой и с выдыхаемым воздухом.

6.4.5.1. Обнаружение спирта изоамилового химическими методами

Для изолирования спирта изоамилового из объектов биоло­гического происхождения применяют метод перегонки с водяным паром. Исследование дистиллятов на наличие спирта изоамилового производят для решения вопроса об отравлении самого­ном, спиртом-сырцом или другими суррогатами спирта этилового.

Для обнаружения спирта изоамилового применяют реакцию Комаровского, основанную на переведении высших спиртов в окрашенные соединения при помощи ванилина, бензальдегида, м-диметиламинобензальдегида, альдегида салициловой кислоты и других ароматических альдегидов. Кроме реакции Комаровского для обнаружения спирта изоамилового используется реакция окис­ления его до кислоты изовалериановой и реакция образования изоамилацетата.

Все указанные реакции дают положительный эффект только в отсутствии воды или при наличии небольших ее количеств в смеси реагирующих веществ. Поэтому перед выполнением пере­численных реакций из дистиллята спирт изоамиловый экстраги­руют эфиром диэтиловым. Эфирную вытяжку разделяют на че­тыре части, каждую из которых помещают в фарфоровую чашку, а затем выпаривают. В полученных остатках определяют наличие спирта изоамилового.

Реакция с салициловым альдегидом. Спирт изоамиловый с альдегидом са­лициловым в присутствии кислоты серной концентрированной дает окраску (реакция Комаровского). По одним дан­ным, при этой реакции кислота серная концентрированная отни­мает воду от спирта изоамилового, в результате чего образуется изоамилен (СН₃)₂—СН—СН = СН₂, который взаимодействует с альдегидом салициловым. Согласно другим данным, кислота серная концентри­рованная окисляет спирт изоамиловый. Образо­вавшийся при этом альдегид кислоты изовалериановой вступает в реакцию конденсации с альдегидом салициловым.

Выполнение реакции. В фарфоровую чашку к остатку после выпаривания эфира диэтилового прибавляют 1 мл 1 % спир­тового раствора альдегида салицилового и 3 мл кислоты серной концентрирован­ной. После охлаждения содержимого фарфоровой чашки ее помещают на 3 мин на кипящую водяную баню. По­явление розово-красной окраски указывает на наличие спирта изоами­лового в пробе. При больших количествах спирта изоамилового окраска жидкости появляется без нагревания.

Эту реакцию дают спирты, содержащие более трех атомов углерода в молекуле. Не дают этой реакции спирты метиловый и этило­вый.

Реакция с п-диметиламинобензальдегидом. Спирт изоамиловый с п-диметиламинобензальдегидом в присутствии кислоты серной концентри­рованной дает окраску (реакция Комаровского).

Выполнение реакции. В фарфоровую чашку к остатку после испарения эфира вносят 5—10 капель 5 % раствора п-диметил-аминобензальдегида в кислоте серной концентрированной. Появ­ление темно-красной окраски указывает на наличие спирта изоамилового в пробе. При разбавлении жидкости водой окраска пере­ходит в фиолетовую.

Эту реакцию не дают спирты метиловый и этиловый. Ее дают высшие спирты.

Реакция образования изоамилацетата. Эта реакция основана на том, что при взаимодействии натрия ацетата со спиртом изоамиловым в присутствии кислоты серной концентрированной обра­зуется изоамилацетат, имеющий запах грушевой эссенции:

Выполнение реакции. К остатку, находящемуся в фарфоровой чашке после испарения эфира, прибавляют 2 капли кислоты серной концентри­рованной и около 0.03 г высушенного натрия ацетата. При слабом нагревании фарфоровой чашки ощущается запах изоамилацетата (запах грушевой эссенции). Этот запах становится более выраженным, если в конце реакции к смеси реагирующих веществ прибавить 20—25-кратный объем воды.

Реакция окисления спирта изоамилового. Спирт изоамиловый под влиянием калия перманганата калия в присутствии кислоты серной концентриро­ванной окисляется до альдегида изовалериановой кислоты (СНз)₂—СН—СН₂—СНО, а затем до кислоты изовалериановой кислоты (СНз)₂—СН—СН₂—СООН.

Выполнение реакции. Остаток, находящийся в фарфоровой чашке, смывают в пробирку с помощью эфира диэтилового, ко­торый затем выпаривают досуха. К остатку в пробирке прибав­ляют 3—5 капель 10% раствора калия перманганата калия и та­кой же объем кислоты серной концентрированной. Пробирку нагревают на кипящей водяной бане в течение 1—2 мин. После этого появляется слабый запах альдегида кислоты изовалериановой, а затем — запах кислоты изовалериановой.

6.4.6. АЦЕТОН

Ацетон СН₃—СО—СН₃ (диметилкетон, пропанон) —бесцвет­ная подвижная жидкость (т. кип. 56.3°С) с характерным запа­хом. Он смешивается с водой, спиртом этиловым и эфиром диэтиловым во всех соотношениях. Из водных растворов ацетон вы­саливается натрия хлоридом, кальция хлоридом, калия карбонатом (жидкость разделяется на два слоя). Ацетон хорошо растворяет соли многих неорганических кислот и ряд органиче­ских соединений. Ацетон получают при сухой перегонке дерева, каменного угля, а также путем синтеза.

Применение. Действие на организм. Ацетон широко исполь­зуется в промышленности как растворитель для извлечения ряда веществ, для перекристаллизации химических соединений, химиче­ской чистки, получения хлороформа и т. д. Пары ацетона тяжелее воздуха. Поэтому в помещениях, в которых происходит испарение ацетона, создается опасность отравления при вдыхании его паров.

По фармакологическим свойствам ацетон относится к числу веществ, проявляющих наркотическое действие. Он обладает кумулятивными свойствами. Ацетон медленно выводится из орга­низма. Он может поступать в организм с вдыхаемым воздухом, а также через пищевой канал и кожу. После поступления аце­тона в кровь часть его переходит в головной мозг, селезенку, печень, поджелудочную железу, почки, легкие и сердце. Содержа­ние ацетона в указанных органах несколько меньше, чем в крови.

Метаболизм. Незначительная часть ацетона, поступившего в организм, превращается в углерода(IV) оксид, который выде­ляется с выдыхаемым воздухом. Часть ацетона выделяется из организма в неизменном виде с выдыхаемым воз­духом и через кожу, а часть — с мочой.

При заключении об отравлении ацетоном следует иметь в виду, что определенное количество его может быть в крови и в моче лиц, страдающих диабетом и некоторыми другими забо­леваниями. Кроме этого, ацетон является метаболитом спирта изопропилового.

6.4.6.1. Обнаружение ацетона химическими методами

В химико-токсикологическом анализе для обнаружения аце­тона применяют реакции с растворами йода, натрия нитропруссида, фурфурола, о-нитробензальдегида и метод микродиффузии.

Реакция образования йодоформа. При взаимодействии аце­тона с раствором йода в щелочной среде образуется йодоформ:

Выполнение реакции. К 1 мл исследуемого раствора прибав­ляют 1 мл 10 % раствора аммиака и несколько капель раство­ра йода в калий йодиде. В присутствии ацетона образуется жел­тый осадок йодоформа с характерным запахом, а его кристаллы имеют характерную форму.

Предел обнаружения: 0.1 мг ацетона в пробе.

Эту реакцию дает и спирт этиловый.

Реакция с натрия нитропруссидом. Ацетон с натрия нитропруссидом в щелочной среде дает интенсивно-красную окраску. При подкислении кислотой уксусной окраска переходит в красно-фиолетовую:

С натрия нитропруссидом окрашенные соединения об­разуют вещества, содержащие енолизируемые СО-группы

Кетоны, в молекулах которых отсутствуют метильные или метиленовые группы, связанные с СО-группами, не дают этой реакции.

Выполнение реакции. К 1 мл исследуемого раствора прибав­ляют 1 мл 10% раствора натрия гидроксида и 5 капель 1 % свежеприготовленного раствора натрия нитропруссида. При наличии ацетона в пробе появляется красная или оранжево-красная окраска. При добавлении 10 % раство­ра кислоты уксусной до кислой реакции через несколько минут окраска переходит в красно-фиолетовую или вишнево-красную.

Такую же окраску с натрия нитропруссидом дает метилэтилкетон. Другую окраски с этим реактивом дают ацетофенон, ацетилацетон, эфир ацетоуксусный, диацетил, альдегид коричный и др.

Реакция с фурфуролом. Эта реакция основывается на способ­ности ацетона конденсироваться с фурфуролом и некоторыми другими альдегидами (ванилин, альдегид салициловый) с обра­зованием окрашенных соединений:

Выполнение реакции. К 1 мл исследуемого раствора прибав­ляют 5 капель 1 % раствора фурфурола в 96 % спирте этиловом и 3 капли 10 % раствора натрия гидроксида. Через 3— 5 мин к этой жидкости прибавляют 10—12 капель кислоты хлороводородной концентриро­ванной. При наличии ацетона появляется крас­ная окраска.

Эта реакция неспецифична для обнаружения ацетона. Ее дают некоторые альдегиды и кетоны.

Реакция с о-нитробензальдегидом. При взаимодействии аце­тона с о-нитробензальдегидом в щелочной среде образуется ин­диго, имеющий синюю окраску:

Малые количества ацетона с о-нитробензальдегидом реаги­руют медленно. При этом сначала появляется желтая окраска, переходящая в желто-зеленую, а затем в зелено-синюю. Образо­вавшееся при этой реакции индиго хорошо экстрагируется хлоро­формом, который приобретает синюю окраску.

Выполнение реакции. В пробирку вносят 3—5 капель иссле­дуемого раствора и каплю насыщенного раствора о-нитробензальдегида в 2 М растворе натрия гидроксида. Смесь слегка на­гревают на водяной бане, а затем охлаждают до комнатной температуры. После этого в пробирку прибавляют 1 мл хлоро­форма и взбалтывают. При наличии ацетона хлороформный слой приобретает синюю окраску.

Предел обнаружения: 100 мкг ацетона в пробе.

При указанных выше условиях спиртовые растворы ацетона дают сине-красную окраску. о-Нитробензальдегид также дает окраску с ацетофеноном, ацетилацетоном, диацетилом, эфиром ацетоуксусным, ацетальдегидом и др.

Метод микродиффузии. Для обнаружения ацетона применяют метод микродиффузии, основанный на реакции с альдегидом кислоты салициловой (см. гл. III, § 3).

6.4.7. ФЕНОЛ

Фенол представляет собой тонкие длинные игольча­тые кристаллы или бесцветную кристаллическую массу со своеобразным запахом. На воздухе по­степенно розовеет. Фенол растворяется в воде в соотношении 1:20, в отношении

1: 20 легко растворяется в спирте этиловом, эфире диэтиловом, хлороформе, жирных маслах, растворах едких щелочей.

Применение. Действие на организм. Фенол применяется в ме­дицинской практике как дезинфицирующее средство. Он широко используется в химической промышленности для получения мно­гих химических соединений (красителей, пластических масс, фар­мацевтических препаратов, средств защиты растений).

Фенол всасывается в кровь через слизистые оболочки и кожу, а затем распределяется в органах и тканях. Фенол, поступивший в организм через пищевой канал, вызывает боли в желудке, рво­ту, понос, иногда с примесями крови. Моча отравленных фенолом имеет оливковый или оливково-черный цвет. При пероральном поступлении в организм 10—15 г фенола наступает смерть. После вскрытия трупов лиц, отравленных фенолом, наибольшее коли­чество его можно найти в почках, затем в печени, сердце, крови и головном мозгу.

Метаболизм. Часть фенола в организме связывается с белка­ми, а часть — подвергается окислению с образованием гидрохи­нона и пирокатехина. Несвязанный фенол и его метаболиты (гид­рохинон и пирокатехин) выделяются с мочой в виде конъюгатов с кислотой серной и кислотой глюкуроновой.

Выделение фенола из биологического материала. Фенол, со­держащийся в трупном материале, выделяют путем перегонки с водяным паром, как и другие вещества этой группы. В ряде случаев возникает необходимость производить обнаружение и ко­личественное определение фенола в моче.

В моче людей и животных, отравленных фенолом, он может находиться в несвязанном виде и в виде конъюгатов с кислотой серной или кислотой глюкуроновой. Для изолирования несвязанного фенола из мочи ее подкисляют слабым раствором кислоты уксусной, а затем фенол отгоняют с водяным паром. Дистиллят, в ко­торый может переходить как фенол, так и часть кислоты уксусной, нейтрализуют натрия гидрокарбонатом, а затем из дистил­лята фенол экстрагируют органическим растворителем. Получен­ную вытяжку используют для обнаружения и количественного определения фенола.

6.4.7.1. Обнаружение фенола химическими методами

Для обнаружения фенола используется часть третьего дистил­лята, который вносят в делительную воронку, прибавляют ра­створ натрия гидрокарбоната до щелочной реакции. Содержимое делительной воронки 2—3 раза взбалтывают с новыми порциями эфира диэтилового по 10 мл. Эфирные вытяжки соединяют вместе и при комнатной температуре выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2—3 мл воды. Полученный раствор используют для обнаружения фенола при помощи реакций образования трибромфенола, индофенола, а также реакций с железа(Ш) хлоридом, реактивом Миллона и др.

Реакция с бромной водой. От прибавления бромной воды к фенолу выпадает осадок трибромфенола:

Br

Выполнение реакции. К 0.5—1.0 мл исследуемого раствора прибавляют 3—5 капель воды бромной. При наличии фенола в исследуемом растворе образуется желтовато-белый осадок три­бромфенола. Эту реакцию дают крезолы, анилин и некоторые другие амины ароматические.

Приготовление реактива (см. Приложение 1, реактив 3).

Индофеноловая реакция. При окислении смеси фенолов и ами­нов (в том числе и аммиака) образуются индофенолы, имеющие соответствующую окраску:

Индофенол

При выполнении индофеноловой реакции в качестве окисли­телей могут быть использованы натрия гипохлорит, известь хлорная, хлорная или бромная вода, водорода пероксид и др. Окис­лителем также может быть кислород воздуха.

Выполнение реакции. К 0.5—1.0 мл исследуемого раствора прибавляют 1 каплю анилина и 2 мл раствора натрия гипохлорита. Появление грязно-фиолетовой окраски указывает на наличие фенола в пробе. После прибавления аммиака появляется устой­чивая синяя окраска.

Индофеноловую реакцию дают фенолы, имеющие фенольную группу в свободном параположении, крезолы и другие соединения, содержащие фенольную группу.

Приготовление реактива (см. Приложение 1, реактив 10).

Реакция Либермана. Эта реакция также основана на образо­вании индофенола. В качестве реактивов на фенолы применяют натрия нитрит и кислоту серную. При взаимодействии натрия нитрита и кислоты образуется кислота азотистая, которая с фенолом образует п-нитрозофенол, при изомеризации которого образуется п-хиноидоксим:

При взаимодействии хиноидоксима с избытком фенола обра­зуется индофенол, имеющий синюю окраску:

Выполнение реакции. 1—2 капли исследуемого раствора (луч­ше брать раствор исследуемого вещества в эфире диэтиловом) вносят в маленький тигель и выпаривают досуха. К сухому остат­ку прибавляют каплю 1 % свежеприготовленного раствора натрия нитрита в кислоте серной концентрированной и смесь оставляют на несколько минут. После охлаждения смеси по кап­лям прибавляют 4 М раствор натрия гидроксида до щелочной реакции (по лакмусу). Появление синей окраски, которая может переходить в красную, а затем в зеленую, указывает на наличие фенола в пробе. Реакцию Либермана дают некоторые фенолы, эфиры фенолов, тиофен и др. Не дают этой реакции нитрофенолы, паразамещенные фенолы и др.

Реакция с железа(III) хлоридом. От прибавления железа(III) хлорида к фенолу появляется синяя или сине-фиолетовая окраска.

Выполнение реакции. 1—2 капли исследуемого раствора по­мещают на фарфоровую пластинку или в маленькую фарфоро­вую чашку и прибавляют 1—2 капли свежеприготовленного 5 % раствора железа(III) хлорида. При наличии фенола по­является фиолетовая или сине-фиолетовая окраска, исчезающая от прибавления воды, спирта и кислот.

С железа(III) хлоридом дают окраску крезолы, оксипиридины, оксихинолин и ряд других веществ, содержащих фенольные группы. Состав и окраска образующихся соединений зависят от природы исследуемых веществ, растворителей и рН среды. о-Крезол и п-крезол с железа(III) хлоридом дают синюю окраску, а п-крезол — красно-фиолетовую.

Реакция с реактивом Миллона. При взаимодействии фенола с реактивом Миллона (смесь нитратов одно- и двухвалентной ртути, содержащая азотистую кислоту) появляется красная или оранжевая окраска. При малых количествах фенолов возникает желтая окраска. Нагревание ускоряет эту реакцию. Вероятно, что при этой реакции вначале образуется 2-нитрозофенол, кото­рый переходит в 1,2-хинонмоноксим:

1,2-хинонмоноксим с ионами ртути образует окрашенное внутрикомплексное соединение:

Выполнение реакции. В микротигель вносят 1—2 капли ис­следуемого раствора, прибавляют 1—2 капли реактива Миллона и оставляют на несколько минут. Если за это время не произой­дет изменение окраски, то смесь нагревают до кипения и кипятят несколько минут. Появление красной окраски указывает на на­личие фенола в пробе. Эту реакцию дают некоторые фенолы, анилин, эфиры фенолов, которые при нагревании образуют фенол. Эта реакция часто используется для обнаружения пара-замешенных фенола, которые не могут быть обнаружены при по­мощи реакции Либермана.