Дослід 1. Кількісне визначення фосфоліпідів у сироватці крові

Принцип методу. Фосфоліпіди осаджуються трихлорацетатною кислотою (ТХАК) разом з білками крові. У осаді після мінералізації визначають вміст фосфору.

Матеріальне забезпечення: сироватка крові, 10 % розчин ТХАК, 56 % розчин хлорної кислоти, розчин амонію молібденовокислого, 1% розчин аскорбінової кислоти, стандартний розчин КН₂РО₄ (0,05 мг в 1 мл), центрифужні пробірки, центрифуга, водяна баня, фотоелектроколориметр (ФЕК), піпетки, пробірки, мікропіпетки.

Хід роботи. У центрифужну пробірку наливають 0,2 мл сироватки крові, 2 мл дистильованої води. Додають 3 мл 10 % розчину ТХАК і через 1-2 хв центрифугують протягом 5 хв при 2000-3000 об/хв. Надосадову рідину зливають, не струшуючи пробірку. До осаду, що містить ліпопротеїни, додають 1 мл 56 % розчину HСlO₄ і нагрівають на киплячій водяній бані протягом 20-30 хв (до знебарвлення розчину).

Після закінчення мінералізації у пробірку до осаду наливають 5 мл води (5 мл розчину мінералізату), 1 мл молібденовокислого амонію та 1 мл 1 % розчину аскорбінової кислоти і перемішують. Одночасно реакцію проводять зі стандартним розчином фосфору. До 5 мл стандартного розчину (0,05 мг/мл) додають 1 мл амонію молібденовокислого та 1 мл 1 % розчину аскорбінової кислоти і перемішують. Через 15-20 хв розчини колориметрують на ФЕКу, використовуючи червоний світлофільтр і кювети на 10 мм проти води.

Розрахунок проводять за формулою:

Ад ´ 0,05

Загальні ліпіди сироватки = -------------- ´ 25 мг/мл або г/л

Аст ´ 0,2

Ад – оптична густина дослідної проби;

Аст – оптична густина стандартного розчину;

0,05 – вміст фосфору в стандартному розчині (мг/мл);

0,2 – об’єм взятої для досліду сироватки;

25 – перерахунок на загальні фосфоліпіди.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Вміст загальних фосфоліпідів у сироватці крові 1,5-3,6 г/л, а лецитину – 0,75-1,2 г/л. Загальну концентрацію фосфоліпідів визначають за вмістом ліпідного фосфору, на долю якого припадає 4 % відносно молярної маси фосфоліпідів (0,1-0,15 г/л). Важливим показником є індекс фосфоліпіди/холестерол, який за фізіологічних умов становить 1–1,5. Цей індекс знижується при атеросклерозі, гіпертонічній хворобі, хворобах печінки.

Визначення вмісту ліпідів у крові має важливе діагностичне значення. Підвищення рівня фосфоліпідів у сироватці крові (гіперфосфоліпідемія) спостерігається при важкій формі цукрового діабету (у 2-2,5 разів), нефрозах, застійній жовтяниці та ін. Зниження рівня фосфоліпідів (гіпофосфоліпідемія) спостерігається при атеросклерозі, малокрів’ї, гарячкових станах, аліментарній дистрофії, захворюваннях печінки. Недостатнє надходження з їжею ліпотропних факторів (холіну, етаноламіну, метіоніну, інозиту) або недостатнє їх ендогенне утворення призводить до гальмування синтезу фосфоліпідів і до жирової інфільтрації печінки.