Практична робота. Дослід 1. Кількісне визначення цукру в крові орто-толуїдиновим методом (за Гульманом)

Дослід 1. Кількісне визначення цукру в крові орто-толуїдиновим методом (за Гульманом).

Принцип методу. Глюкоза при нагріванні з орто-толуїдином у розчині оцтової кислоти утворює сполуку синьо-зеленого забарвлення, інтенсивність якого є прямопропорційною до концентрації глюкози.

Матеріальне забезпечення: кров, 3 % розчин трихлорацетатної кислоти (ТХАК), орто-толуїдиновий реактив, стандартний розчин глюкози (4 ммоль/л, 720 мг глюкози розчинити в 1 л дистильованої води), дистильована вода, штатив з пробірками, піпетки, мікропіпетка на 0,1 мл, центрифуга, центрифужні пробірки, ФЕК, водяна баня (100⁰ С).

Хід роботи. У дві центрифужні пробірки наливають по 0,9 мл 3 % розчину ТХАК. В одну з них вносять 0,1 мл крові, а в другу – 0,1 мл стандартного розчину глюкози. Вміст пробірок перемішують і центрифугують при 3000 об/хв протягом 10 хв. З кожної пробірки відбирають по 0,5 мл надосадової рідини та додають по 4,5 мл орто-толуїдинового реактиву. Поміщають пробірки в водяну баню на 8 хв. Потім їх виймають з водяної бані та охолоджують до кімнатної температури. Після цього на ФЕКу визначають оптичну густину проб у кюветах на 10 мм проти води при довжині хвилі 630 нм, використовуючи червоний світлофільтр.

Розрахунок. Вміст глюкози визначають за формулою:

С_СТАНД. × А_ДОСЛ.

С =

А_СТАНД.

де: С – концентрація глюкози в крові, ммоль/л;

С_СТАНД. – концентрація стандартного розчину глюкози;

А_{ДОСЛіду} – оптична густина досліджуваної проби;

А_СТанд. – оптична густина стандартного р-ну глюкози.

Порівняти з нормою отриманий результат. Зробити висновок.