Работа 21. Разделение модельной смеси водорастворимых витаминов методом тонкослойной хроматографии

Принцип метода. Метод основан на способности жидкой фазы, продвигающейся по слою адсорбента (силикагель) перемещать компоненты разделяемой смеси с разными скоростями. Положение пятен разделяемых витаминов на хроматограмме характеризуют значением Rf.

Реактивы и исследуемый материал

1. Подвижная фаза 1 (бензол-этанол-уксусная кислота-ацетон, 70:20:5:5). 2. Подвижная фаза 2 (бензол-этанол-уксусная кислота-ацетон 55:35:5:5). 3. Пластинки силуфол. 4. Смесь витаминов (тиамин, пиридоксол, аскорбиновая кислота, рибофлавин, никотиновая кислота) в 50% этаноле.

Ход работы

В угол пластинки силуфол на расстоянии 2 см от каждой стороны наносят раствор смеси витаминов по 5 мкл (3 мкг/мкл) растворов тиамина, аскорбиновой кислоты, никотиновой кислоты, 10 мкл (3 мкг/мкл) раствора пиридоксола. Проводят двумерную хроматографию. Для первого направления используют подвижную фазу 1, затем подсушивают и проводят разделение в перпендикулярном направлении подвижной фазой 2. (Замена этанола метанолом существенно улучшает качество разделения). Затем пластины высушивают и выявляют пятна витаминов в ультрафиолетовом свете, используя следующие значения Rf для тиамина, пиридоксола, витамина С, рибофлавина, никотиновой кислоты с подвижной фазой 1 - 0,00, 0,17, 0,48, 0,53, 0,68, а с подвижной фазой 2 – 0,00, 0,60, 0,16, 0,22, 0,44, соответственно.