Принципы диагностики НБО

Показания к бх исследованиям нбо:

Неясные и затяжные формы желтухи у детей в период новорожденности и первые года жизни 2) Хр. Расстройства пищеварения не инфекционной природы (диарея, рвота, ранний цирроз) 3)Аномалии развития скелета нерахитического происхождения (нарушение походки, задержка физ развития,различные формы гипотрофий,не устраняющихся коррекцией питания) 4)Нарушение речи(алалия или дислексия) 5)Нарушение органов зрения()снижение остроты зрения,вывих и подвывих хрусталика, каатаракта, помутнение роговицы,нистагм) 6)Дефекты поведения (двигательная расторможенность, мышечная гипотония и гиперрефлексия) 7) снижение слуха или полная глухота 8) судорожный синдром, не поддающийся терапии 9) умственная отсталость(изолированная и в сочетании с патологией других органов) 10) необычные волосы, ногти, лицо,гипер-или гипопигентация, светочувствительность 11) стойкие изменения в моче- протеинурия, гематурия, лейкоцитурия,фосфатурия, гипо- или гипергликемия, необычный цвет и запах мочи

Группы населения подлежащих обследованию:

Новорожденные, дети из спец учреждений, дети направленные на обследование по поводу показаний.

Двухэтапная система обследования на НБО: первый: Просеивающие программы. -массовый -селективный скрининг. Второй этап: -матоды подтверждающие диагноз

Скрининговые программы. Иммуноферментный анализ, биохимические методы и др.

ДНК-диагностика:

Прямая – мутации определенного гена

Косвенная – семейный анализ различных полиморфных вариантов ДНК

Косвенная диагностика – исторически более ранний подход.

Полиморфные варианты:

Минисателлиты	Микросателлиты
Мономер 5-30 пн	1-4 пн
Размер 0,5-20 kb	20-40 пн
Блот-гибридизация	ПЦР, электрофорез
Каждый человек имеет уникальный образец; образец ребенка является смесью родительских образцов	Для каждого человека есть вероятность
Наследование по Менделю
Достаточно одного эксперимента для надежной идентификации образца	Необходимо идентифицировать большое количество локусов

Методы прямой диагностики:

Блот-гибридизация

ПДРФ-анализ

ПЦР-амплификация с последующим электрофорезом

Аллель-специфическая гибридизация (амплификация)

Определение статуса метилирования

Анализ экспансии тринуклеотидных повторов

SSCP-анализ

гетеродуплексный анализ

RT-ПЦР

Секвенирование

Метод детекции ошибок спаривания

Биочиповые технологии

76. Просеивающие программы, скрининг.

Двухэтапное система обследования на НБО: 1) просеивающие программы (массовый скрининг, селективный) 2) исп методы подтверждающие диагноз

Массовый скрининг новорожденных:

Скрининг – предположительное выявление не диагностированных ранее болезней\дефекта с помощью тестов, обследований и других процедур, дающих быстрый ответ.

В практике для массового скрининга используют кровь из пяточки, высушенную на фильтровальную бумагу.

Цели и задачи МС:

1)Доклиническое выявление, когда раннее лечение дает хороший эффект 2)изучение распространенности наследств аномалий обмена веществ (геногеографии) 3) популяционные исследования по определению частоты метаболического дефекта 4) углубление знаний о сущности уже известных НБО, описание семей, прогноз потомства 5) разработка методов диетотерапии 6) изучение особенности бх и клинических вариантов патологии в период новорожденности и др возрастных периодах 7) выявление гетерозиготного носительства мутантного гена.

Требования к НБО, которую целесообразно выявлять при МС:

1)Заболевания, приводящие без своевременного выявления и лечения к серьезному снижению качеству жизни и трудоспособности без лечения 2)заболевания, которые достаточно распространены в популяции(не менее 1:5090-20000) 3) заболевания, для которых существуют адекватный метод диагностики 4) заболевания, которые поддаются лечению с достижением принципиального эффекта для больного или общества и для которого разработаны четкие меры профилактики.

МС: фенилкетонурия (1:8000), врожденный гипотериоз 1:4000, адреногенитальный синдром, галактоземия, муковисцидоз

Требования к методам: 1) метод должен быть диагностически значимым(т.е. Положительные и отрицательные результаты полученные с его помошью, должны соответствовать наличию или отсутствию заболевания) 2) надежен и воспроизводим (Результаты его применения должны одинаково читаться различными его испольнителями на одном и то же образце, один и тот же образец при 2кратном не зависимой проверке должен одинаково оцениваться) 3)метод должен использовать легкодоступный материал в малых количествах (при чем желательно, чтобы исследуемый образец был пригоден для перессылки и длительного хранения) 4) экономически выгодный(должны входить все затраты включая перепроверку ложно положительных результатов, стоимость программы не должна превышать стоимости содержания невыявленных и нелеченных больных) 5) не должен давать ложноположительных результатов Основное требование к программам массового просеивания- обеспечение принципиальных преимуществ лицам- в терминах выживаемости, здоровья,благополучия физических, социальных и эмоционнальных функций.

Время диагностирования – промежуток между периодом когда можно диагностировать и лечение еще эффективно(ФКУ- 5-6 день после рождения ВГ- 10 день после рождения Адреногенитальный синдром-2 день после рождения)

77. Селективный скрининг на НБО

Под селективным скринингом понимают просеивание контингентов повышенного риска, в котором ожидается накопление исследуемых болезней обмена

-Начальные тесты с мочой(уринолизиз), -полуколичественные и количественные тесты. Самый полезный материал для выявления возможного метаболического нарушения при нбо – хронометрированная и измерительная проба мочи. Моча собирается в течении 24 часов без консервантов в холодильнике.

Качественные тесты с мочой: рН, белок, сахар.,Тест с FeCL (р-в Фелига),Тест на гомогентизиновую к-ту,Тест на ксантуреновую к-ту,Тест на кетокислоты,Тест Бенедикта на редуцирующие вещества,Тест на цистин и гоцистин,Тест на пролин,Тест на α — азот,Определение креатинина

Цветные тесты с мочой: цпх тесты – Na и выделение гаг-ов гомоцистин (-электрофорез), тест бенедикта на редуцирующие вещества - тонкослойная хромотография – количественное определение выделение сахара, тест с нитропрусидом – количественное определение цистина и гомоцистина.

Хроматографические методы исследований Основаны на различном распределении аминокислот, углеводов и др.метаболитов из биологических жидкостей между неподвижной и подвижной фазами. Используются методы распределительной хроматографии на бумаге и в тонком слое селикагеля или целлюлозы.

Элюат наносится на стартовую дорожку, а рядом наносятся свидетели (стандартные растворы аминокислот или углеводов).

Разделение аминокислот достигается 1-2 кратным пропусканием через хроматограмму различных систем растворителей.

После высушивания хроматограмма окрашивается и читается. Тонкослойная хроматография (ТСХ)

двумерная ТСХ аминокислот на пластинах Merck (к,м), двумерная ТСХ фенольных кислот на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ имидазолов на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ моно- и дисахаридов на пластинах Merck (м), двумерная ТСХ моно- и,дисахаридов на пластинах Merck (м),одномерная ТСХ олигосахаридов на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ сиаловых кислот на пластинах Merck (м) Количественные и полуколичественные тесты: Определение креатинина (м),Определение мочевой кислоты (м),Определение лактата (к,м),Определение пирувата (к,м),Определение кетоновых тел (к,м),Определение ионов аммония(к),Определение холестерина (к),Определение ионного состава (к,м)),Определение газового состава (к),Определение карнитина (к),Определение ГАГ-ов (м),Определение сиаловых кислот (м)