Микрометод токсико-биологической оценки рыбы и других гидробионтов

Для предварительной экспрессной санитарно-биологической оценки гидробионтов и определения их безвредности в качестве тест-организ­ма используют инфузорию тетрахимена пириформис (штамм WH_M).

Метод не требует дефицитных дорогостоящих реактивов и обору­дования, дает сопоставимые результаты с исследованиями на выс­ших животных, а также позволяет оценить ветеринарно-санитарное качество и дать биологическую оценку рыбы и других гидробионтов в тех случаях, когда их невозможно изучить на высших животных.

Продолжительность исследования составляет 24-72 ч.

Принцип метода. Метод основан на посеве лабораторной куль­туры тетрахимена пириформис во флаконы с исследуемыми проба­ми мяса рыб и др. водных организмов.

Средой разбавления исследуемого материала служит 0,56% ра­створ аптечной морской соли.

Оценку качества рыбы, других гидробионтов или продуктов из них проводят по выращенной культуре инфузорий. Число простейших орга­низмов подсчитывают под малым увеличением микроскопа в камере Фукс-Розенталя. Качество инфузорий определяют по характеру дви­жения, наличию измененных форм и мертвых клеток в культуре.

Маточную культуру тетрахимена пириформис выращивают на стандартной среде: пептона бактериологического - 2 г, глюкозы -0,5, дрожжевого экстракта - 0,1, аптечной морской соли - 0,1 г на 100 мл дистиллированной воды, рН 7,0-7,5.

Приготовленную среду слоем жидкости не выше 1,5 см разли­вают в колбы Эрленмейера вместимостью 50 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм 30 мин. Соблюдая правила асептики, вносят 0,1 мл культуры в колбы и выращивают в термостате при 25°С или в темном шкафу при комнатной температуре. Посев на свежую среду осуществляют через 4-7 сут.

Культуру тетрахимена пириформис можно хранить при ком­натной температуре до 2 мес. путем консервирования в 1% раство­ре глюкозы (10 мл раствора глюкозы + 0,5 мл культуры).

Четырехдневная культура инфузорий с добавлением 5-7 мг ли-поцеребрина аптечного без пересева сохраняется 3-4 мес. в холо­дильнике при температуре 4-5° С.

При посеве на 0,56% раствор аптечной морской соли или угле­водно-солевую дрожжевую среду (УСД) тетрахимена пириформис сохраняет жизнеспособность 1-1,5 мес.

Среда разбавления исследуемого материала. Для разбавления применяют 0,56% раствор аптечной морской соли, рН 7-7,5. При­готовленный раствор разливают в колбы на 150-200 мл и стерили­зуют в автоклаве при 0,5 атм 30 мин. В среде разбавления инфузо­рии не размножаются, но сохраняют жизнеспособность 30-45 сут. Приборы, посуда, материалы и реактивы. Приборы: термо­стат, автоклав, аппарат Шуттеля, микроскоп световой МБС, потенци­ометр, весы аналитические, сушильный шкаф, центрифуга, водяная баня, мясорубка, гомогенизатор, камеры Фукс-Розенталя, штативы. Посуда: фарфоровые ступки, колбы Кьельдаля, конические кол­бы Эрленмейера на 50 мл, пастеровские пипетки, стеклянные палоч­ки, мерные пипетки на 0,1-2,0 мл, предметные и покровные стекла, флаконы из-под антибиотиков с резиновыми пробками, у которых в центре вставлены стеклянные трубки с ватными пробками с целью

аэрации среды, воронки.

Материалы: вата, марля, индикаторная и фильтровальная бумага.

Реактивы: пептон бактериологический, дрожжевой экстракт, глюкоза в порошке, аптечная морская соль, хлористый натрий, 5%

спиртовый раствор йода, 10% раствор едкого натрия, стандартный казеин, порошок сублимированного куриного яйца.