Пояснения в тексте

Внутри ампулы смесителей находятся стеклянные бусинки – красная в смесителе для эритроцитов и белая – в смесителе для лейкоцитов. Они служат для облегчения перемешивания крови с раствором.

Подсчет форменных элементов крови осуществляется в счетных камерах с сеткой Горяева (Рис. 14.2). Счетная камера представляет собой шлифованное предметное стекло, на котором имеются три полосы, разделенные желобками. Средняя полоса ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам желобком. На средней полосе по обе стороны желобка нанесены сетки конструкции Горяева.

Рис. 14.2. Счетная камера:

a – общий вид; б – вид сбоку; 1 – пластинка с выгравированной сеткой

Рис. 14.3. Часть сетки Горяева (зачернены большой – Б и малый – М квадраты)

Сетка Горяева состоит из 255 больших (Б) квадратов, 25 из которых дополнительно поделены на 16 малых (М) квадратов (Рис. 14.3). В результате этого на площади в 1мм² образуется 400 малых квадратов со стороной 1/20 мм, площадью 1/400 мм² и объемом 1/4000 мм³. Заметим, что 1 мм³ – 1мл.

Кровь для анализа обычно берется из подушечки концевой фаланги 4-го пальца левой руки. Это делают потому, что 4-й палец имеет отделенное от других пальцев синовиальное влагалище, благодаря чему в случае возможного воспаления в зоне скарификации воспалительный процесс не распространяется на всю кисть.

Цель: определить количество эритроцитов в 1 л крови.

Объект исследования: человек.

Оборудование и материалы: игла-скарификатор, микроскоп, сме-ситель для забора крови, счетная камера с сеткой Горяева, покровные стекла, стеклянная чашечка, 3% раствор хлористого натрия, марлевые салфетки, вата, спирт, настойка йода, почкообразный тазик.

Порядок выполнения. В специальную чашечку налить 3% раствор хлористого натрия. В растворе такой концентрации эритроциты уменьшаются в объеме (сморщиваются), лучше просматриваются и сосчи-тываются. Ватным тампоном обработать палец спиртом и проколоть кожу иглой-скарификатором. Прокол лучше делать с боковой поверхности подушечки пальца, где более крупные сосуды располагаются под кожей и меньше возможностей в последующем повреждении тромба. Глубина прокола соответствует 2–3мм, что позволяет получить необходимое количество крови. Первую выступившую каплю стереть ватным тампоном. Во вторую каплю крови погрузить кончик меланжера для эритроцитов, который при этом держать горизонтально или немного наклонить верхний конец вниз. Набрать кровь до метки 0,5, обтереть кровь с кончика смесителя и, надев резиновую трубку, сразу же набрать в него из чашечки раствор 3% NaCl до отметки «101» (разведение в 200 раз). Вначале смеситель держат в растворе под углом и кровь набирают быстро, а в последней четверти – медленно, чтобы закончить точно у верхней метки. Затем после заполнения перевести меланжер в горизонтальное положение, снять резиновую трубку и зажать двумя пальцами (большим и средним) его концы. Плавным покачиванием перемешать пробу крови с раствором и оставить заполненный меланжер на несколько минут. Счетную камеру и покровное стекло протереть сухой марлей. Положить покровное стекло на сетку камеры и большими пальцами обеих рук притереть его к камере до появления радужных концентрических (ньютоновых) колец. Если кольца не образуются, аккуратно протереть покровное стекло и камеру Горяева тампоном со спиртом (для обезжиривания), затем марлей насухо, и снова повторить предыдущую манипуляцию.

Перед заполнением камеры выпустить первую каплю из смесителя на ватку. Поднести конец смесителя к краю покровного стекла и осторожно выпустить небольшую каплю раствора. При этом жидкость распространяется под покровное стекло и заполняет пространство между ним и основанием камеры. Камеру заполнить так, чтобы в нее не попали пузырьки воздуха. Лишнюю жидкость удалить марлей. Через 2–3 мин., когда эритроциты осядут, установить камеру под объектив микроскопа и начать подсчет. Подсчет эритроцитов производится на площади 5 больших квадратов, расположенных по диагонали, каждый из которых разделен на 16 маленьких (т.е. в 80 малых квадратах) под малым увеличением микроскопа (×8 или ×10).

Подсчет необходимо вести в одном и том же порядке, не допуская повторного подсчета одних и тех же клеток. Для этого во избежание ошибок руководствуются правилом Егорова: относящимися к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, расположенные на правой и нижней границах не считаются.

Зная объем параллелепипеда (V = 1/4000 мкл) и степень разведения крови (K = 200), можно определить количество эритроцитов (Э) в 1 л крови по формуле:

где: N – количество эритроцитов, подсчитанных в 80, т.е. в (5∙16) малых квадратах. С учетом приведенных чисел, упростим формулу для расчета количества эритроцитов в 1 л крови:

Для подсчёта эритроцитов крови может быть использован пробирочный метод, предложенный Н.М. Николаевым. Для этого в лабораторную пробирку (сухую и чистую) длиной от 15 см и поперечником не более 1,5 см наливают заранее 4 мл раствора хлористого натрия (3%) с помощью градуированной пипетки на 5–10 мл для подсчёта эритроцитов. Набирают из пальца кровь в капилляр от гемометра Сали до метки (20 мм³) и добавляют в пробирку. Тем самым в пробирке с хлористым натрием получается требуемое разведение эритроцитов в 200 раз.

Перед подсчётом производится осторожное перемешивание отстоявшейся разведенной крови в течение 2–3 минут. Для этого пробирку для подсчёта эритроцитов зажимают 4 пальцами правой руки, прижимают открытым концом к сухой чистой мякоти большого пальца и опрокидывают вверх и вниз. Образующийся при этом пузырёк воздуха способствует размешиванию. Незначительное количество жидкости при смачивании мякоти большого пальца снимается краем пробирки.

После размешивания забирают из пробирки круглым спаянным концом тонкой стеклянной палочки каплю жидкости и вносят ее под притёртое стек-ло счетной камеры. Дав отстояться крови в камере, через 2–3 минуты приступают к подсчёту.

Результаты. Указать подсчитанное количество эритроцитов.

Выводы. Сравнить полученную величину с нормой.

В норме 1 л крови взрослого мужчины содержит (4,5–5)×10¹² эритроцитов. У женщин этот показатель ниже – (3,7–4,7)×10¹²/л, что связывают с ингибирующим влиянием эстрогенов на эритропоэз. Снижение концентрации эритроцитов ниже нормы называется эритропенией и является основным критерием анемий (дефицитных, постгеморрагических, гемолитических). Повышение числа эритроцитов – эритроцитоз (полиглобулия, полицитемия) может быть обусловлен: стимуляцией эритропоэза в ответ на пребывание человека в горах (физиологический эритроцитоз), снижением массы циркулирующей крови и плазмы при нормальном объеме циркулирующих эритроцитов (например, при интенсивной физической нагрузке), а также усиленным образованием эритроцитов в костном мозге, сопровождающим ряд заболеваний.