Тема 10. 3. Методы оценки иммунного статуса организма человека

Иммунный статус человека складывается из комплекса не­специфических и специфических механизмов, обеспечиваю­щих антибактериальную, противовирусную и противоопухоле­вую защиту организма. К механизмам неспецифической защи­ты против бактерий относятся фагоцитоз гранулоцитами и моноцитами/макрофагами и активация системы комплемента по альтернативному пути. Макрофаги не только захватывают и убивают бактерии, но при контакте с ними продуцируют и секретируют биологически активные молекулы — цитокины, запускающие неспецифический защитный процесс воспале­ния. Механизмы неспецифической противовирусной и проти­воопухолевой защиты: клетки — естественные киллеры и мо­лекулы семейства интерферонов. Специфическую антибакте­риальную защиту против внеклеточно паразитирующих бакте­рий обеспечивают специфические антитела — иммуноглобули­ны путем усиления фагоцитоза (опсонизация) или активации системы комплемента по классическому пути иммунными комплексами. Специфическая защита от бактериальных токси­нов является функцией специфических антитоксических анти­тел — иммуноглобулинов, способных нейтрализовать экзоток­сины бактерий. Специфическую защиту против внутриклеточ-но паразитирующих микроорганизмов берут на себя активиро­ванные Т-лимфоциты и макрофаги, продуцирующие цитоки­ны: интерлейкины, гамма-интерферон, фактор некроза опухо­ли, обеспечивая при этом развитие в очаге инфекции реакции иммунного воспаления — гиперчувствительности замедленно­го типа (ГЗТ). Специфическую противовирусную защиту обес­печивают активированные цитотоксические лимфоциты (CTL), способные распознать инфицированную клетку и убить ее при непосредственном контакте. В специфической противовирус­ной защите велика роль специфических антител иммуноглобу­линов, которые могут нейтрализовать внеклеточные вирусы или вызвать гибель инфицированных вирусом клеток посред­ством антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦТ) естественных киллеров и других клеток.

Оценка иммунного статуса включает количественную и ка­чественную оценку основных факторов неспецифической за­щиты (фагоцитирующих клеток, системы комплемента, есте­ственных киллеров, системы интерферонов) и основных зве­ньев иммунной системы: Т-лимфоцитов и их главных конеч­ных продуктов — цитокинов; В-лимфоцитов и их главных ко­нечных продуктов — иммуноглобулинов.

Количественная оценка клеточных популяций начинается на этапе клинического анализа крови, который дает информа­цию о количестве циркулирующих в крови гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов. Дальнейшая дифференцировка лим­фоцитов основывается на наличии у них так называемых по­верхностных маркеров, т.е. особых молекул (их принято обо­значать "CD" — сокращение от английского термина "clusters of differentiation") в составе клеточных мембран, которые в качестве антигенов выявляются при взаимодействии со специ­фическими моноклональными антителами.

Качественная (функциональная) оценка клеточных популя­ций и субпопуляций проводится с помощью соответствующих функциональных тестов: у Т- и В-лимфоцитов оценивают про-лиферативный ответ на контакт со стандартными митогенами или микробными антигенами (реакция бласттрансформации лимфоцитов — РБТЛ) или ответ продукцией цитокинов на кон­такт с митогеном. У фагоцитирующих клеток оценивают функ­цию фагоцитоза: активность захвата стандартных частиц — объ­ектов фагоцитоза, бактерицидность фагоцитов косвенно оце­нивается по высоте окислительного взрыва, индуцированного фагоцитозом (НСТ-тест). Концентрацию молекул иммуногло­булинов четырех основных изотипов — классов (IgG, IgM, IgA, IgE) в сыворотке крови и в других биологических жидкостях (слюна, спинномозговая жидкость и др.) определяют, пользу­ясь наборами специфических моноклинальных антител, полу­ченных против изотипспецифических антигенов этих иммуно­глобулинов. С помощью наборов таких антител можно прово­дить реакцию комплексообразования (иммуноглобулины, при­сутствующие в сыворотке крови, выполняют в этой реакции функцию антигенов), результаты которой поддаются количест­венному учету с помощью нефелометра или спектрофотометра. Другой вариант учета — проведение твердофазного иммуно-ферментного анализа с участием тех же изотипспецифических моноклональных антител и антииммуноглобулиновой мечен­ной пероксидазой сыворотки против иммуноглобулинов мыши (так как все моноклональные антитела получены из клеток мышей).

План

Программа

Изучение методов оценки факторов неспецифической защиты организма.

Изучение методов оценки Т-системы иммунитета.

Изучение методов оценки В-системы иммунитета.

Демонстрация

Характерная морфология гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов в мазке крови, окрашенном по методу Романовского-Гимзы.

Отдельные стадии фагоцитоза бактерий и дрожжеподобных грибов рода Candida макрофагами и гранул о-цитами.