Метод серийных разведений

№ п\п	Ингредиенты	Концентрация антибиотика (мкг/мл):
						КК	КА
	Питательный бульон, мл. Основной раствор антибиотика (128 мкг/мл), мл вносится только в первую пробирку и контроль антибиотика (КА).	2,0 } 2,0	2,0 } 2,0	2,0 } 2,0	2,0 } 2,0	2,0 } 2,0	2,0 } 2,0Þ	2,0	2,0   2,0
	Исследуемая культура (106 -107 бактерий в 1мл), мл.	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1

Термостат +37⁰C, 18 – 20 часов.

Примечание: Þ из последней пробирки 2,0 мл выливают в дез. раствор.

2. Диско-диффузионный метод. При определении чувствительности методом диффузии в агар, чистую культуру возбудителя засевают “газоном“ на специальный питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (10⁸ КОЕ/мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают 6-8 дисков. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику. Поскольку для получения результатов методом диффузии в агаре используют стандартизованные условия (состав и количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с антибиотиком соответствует определенное значение МИК. Исходя из значений МИК, и зная концентрацию антибиотика в сыворотке крови (очаге инфекции) можно определить терапевтический индекс: Т=МИК/К. Терапевтический индекс не должен превышать значения 0,3. Следовательно, по диаметру зоны можно определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику: чувствительный, умеренно-устойчивый, устойчивый.

К категории чувствительных относят те штаммы, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК.

В категорию умеренно-устойчивых относят микроорганизмы, для подавления роста которых, in vivo потребуются максимальные терапевтические дозы препарата.

Категорию устойчивых составляют те микроорганизмы, в отношении которых данный антибиотик будет неэффективным in vivo.

3. Метод Е-тестов. Метод определения чувствительности с помощью Е-тестов. Е-тесты представляют собой бумажные полоски, пропитанные не одной, а рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16, 8, 4…….. мкг/мл). Е-тесты, как и диски при диско-диффузионном методе, укладывают на поверхность стандартного питательного агара, засеянного испытуемой культурой в виде “газона“. После инкубирования вокруг полоски формируется эллипсовидная зона задержки роста микроорганизма, которая сужается в области малых концентраций и “пересекает“ полоску на уровне, соответствующем величине МИК.

Тема лабораторного занятия: Инфекция.

ЦЕЛИ: знать причины и условия возникновения инфекционного процесса, его формы; патогенные свойства и факторы патогенности микроорганизмов, способы определения их вирулентности; получение и применение микробных токсинов и аттенуированных штаммов микроорганизмов; способы обнаружения микробов в организме; уметь обосновывать выбор метода определения вирулентности микроорганизма; оценивать результаты опыта определения вирулентности.

МАТЕРИАЛЬНО - ТЕХНИЧЕСКОЕ ОСНАЩЕНИЕ.

1.Инструменты и оборудование: Микроскоп, красители, медицинские лотки, бактериальные петли, пробирки, пипетки, предметные стекла, культуры микроорганизмов. Питательные среды. Микропрепараты возбудителей основных групп инфекционных заболеваний человека.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1.Что такое инфекция? Чем отличаются инфекция и инфекционная болезнь?

2.Что такое патогенность? Как классифицируются бактерии по признаку патогенности?

3.Какие Вы знаете факторы патогенности? Их назначение.

4.Чем отличаются экзо – и эндотоксины бактерий?

5.Что такое вирулентность? Что является материальной основой вирулентности?

6.Как определяют вирулентность микробов? В каких единицах она измеряется?

7.В каких единицах измеряется сила микробных экзотоксинов?

8.Что может способствовать понижению вирулентности? Повышению?

9.Что такое аттенуированный штамм? Как получают и для чего используют аттенуированные штаммы?

10.Какова роль макроорганизма в развитии инфекционного процесса? Чем обусловлена восприимчивость организма к инфекции?

11.Назовите пути распространения микробов в организме.

12.В чем состоят различия сепсиса и бактериемии? Что такое одонтогенный сепсис?