Изучение некоторых факторов патогенности бактерий

Гемолизин. Произведен посев культуры стафилококка на кровяной МПА. Гемолизин определяют по образованию зон разру­шения эритроцитов вокруг колоний в виде просветления питательной среды.

Плазмокоагулаза. Чистая культура стафилококка внесена в I мл стерильной цитратной плазмы крови кролика, разведенной 1:5. Реакция учитывается после инку­бации при 37⁰ С в течение 1,2, 4, 18 часов. При наличии у штамма ста­филококка плазмокоагулазы наблюдается коагуляция плазмы с образованием студнеобразного сгустка.

Гиалуронидаза гидролизует гиалуроновую кис­лоту, которая перестает образовывать сгусток при добавлении уксусной кислоты. Для определения этого фермента в пробир­ку с гиалуроновой кислотой вносят суточную культуру бактерий или фильтрат бульонной культуры и инку­бируют в течение 15 мин при 37⁰ С. Затем добавляют 2—3 капли концентрированной уксусной кислоты. В пробах, где содержится гиалуронидаза, образования сгустка не происходит.

Лецитиназа выявляется при посеве золотистого стафилококка на желточно-солевой агар, содержащий лецитин. Вокруг колоний, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском в виде радужного венчика.

Дермонекротоксин. Кролику внутрикожно вводят 0,2 мл двухмиллиардной взвеси стафилококка. При наличии у культуры дермонекротоксина на месте инъекции образуется инфильтрат с по­следующим некрозом ткани.

Постановка биопробы с целью диагностики ботулизма. Ис­следуемый материал (фильтрат, полученный из консервов домашнего приготовления – грибы), послуживший причиной отрав­ления больного вводят белой мыши внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Мышь погибает с явлениями параличей.

3. Вскрытие и бактериологическое исследование трупа белой мыши, павшей в результате биопробы. Мышь заражают per os материалом (кусочки мяса), послужившим причиной пищевой токсикоинфекции. Исследуемые кусочки мяса растирают в ступке со стерильным песком в небольшом количестве физиологического раствора, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут для осаждения грубых кусочков материала и песка. Прозрачную надосадочную жидкость набирают шприцом со специальной изогнутой инъекционной иглой, конец которой затуплен с помощью напильника или надфиля, вводят через рот внутрижелудочно.

После осмотра трупа животного прикрепляют к препаровальной доске, располагая его брюшной стенкой вверх; ко­жу обрабатывают дезинфицирующим раствором или спиртом. Во избежание за­грязнения содержимым кишечника сначала вскрывают кожу, тупо отсепаровывая её от подкожной жировой клетчатки. Осматривают место инъекции и регионарные лимфатические узлы. Пинцетом захватывают мечевидный отросток грудины, подтягивая его вверх. Вырезают грудину вместе с прилегающими отрезками ребер и клю­чицы. После вскрытия грудной полости раскаленным скальпелем прижигают верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают миокард. При этом в капилляр пипетки поступает кровь из сердца. Проводят посев крови на МПА. Затем вскрывают брюшную полость, осматривают внутренние органы, производят посевы-отпечатки из органов на сектора чашки Петри с МПА. С этой целью при­жигают поверхность органа раскаленным скальпелем, отрезают кусочек и делают посев-отпечаток на пластинчатый МПА. Параллельно готовят маэки-отпечатки из пече­ни, почек, легких и селезенки, для чего кусочком органа прикасаются поверхностью разреза к предметному стеклу. Мазки фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают по Граму, микроскопируют; посевы помещают в термостат.

Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы зараз­ный материал не попадал на стол. Запрещается класть на стол инструменты, применяющиеся при вскрытии трупа. После вскрытия рабочее место убирают и дезинфицируют. Труп животного помещают в дезинфицирующий раствор. Ход исследова­ния оформляется протоколом по следующему образцу:

Протокол № 3

Бактериологическое исследование трупа белой мыши, павшей в результате биопробы.