Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | ||
|
Компоненты реакции: сыворотка больного в разведении 1:25, бруцеллезный диагностикум (взвесь убитых бруцелл), физиологический раствор.
Реакцию ставят по следующей схеме (табл. 10):
Таблица 10
Постановка развернутой реакции агглютинации
Компоненты реакции | Разведения сыворотки | КД | КПС | |||
1:25 | 1:50 | 1:100 | 1:200 | |||
Физиологический раствор | - | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - |
Исследуемая сыворотка | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - | 1,0 |
Диагностикум | 2 капли | 2 капли | 2 капли | 2 капли | 2 капли | 2 капли |
КД – контроль диагностикума, КПС – контроль положительной сыворотки
Пробирки инкубируются в термостате при 370 С в течение 2 часов, 18-20 часов при комнатной температуре. В положительном случае на дне пробирки выпадает осадок в виде «зонтика». Титр антител определяют по наибольшему разведению сыворотки, при котором наблюдается образование агглютината. Диагностический титр антител при бруцеллезе - 1:100.
3. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов (завершенный фагоцитоз стафилококка) – рис. 13. В пробирку помещают 0,1 мл 2% раствора лимоннокислого натрия, 0,2 мл исследуемой крови, 0,1 мл взвеси тест - культуры стафилококка (концентрация 400 млн. микробных тел в I мл), содержимое пробирки тщательно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Затем пробирки центрифугируют и из сероватой пленки на границе плазмы и эритроцитов готовят мазки, которые фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимза. Микроскопируют с использованием иммерсионной системы. Определяют фагоцитарную активность лейкоцитов (ФА - процент фагоцитирующих клеток при подсчете 100 фагоцитов) и фагоцитарный показатель (ФП - число микробов, поглощенных одним лейкоцитом). У здоровых лиц ФП составляет 5-9, ФА - 50 – 70%.
4. Изучение незавершенного фагоцитоз гонококка (микроскопия демонстрационного микропрепарата, приготовленного из гнойного отделяемого уретры больного гонореей) - рис. 14. Зарисовать разрушенные лейкоциты с непереваренными гонококками.
5. Учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с сывороткой крови больного при подозрении на носительство брюшнотифозного микроба - демонстрация. РНГА используется для выявления антител в крови больного или для идентификации неизвестного возбудителя по антигенам в патологическом материале. Соответственно используют коммерческие эритроцитарные диагностикумы из эритроцитов, нагруженных антигенами или антителами. В данном случае используется антигенный Vi – эритроцитарный брюшнотифозный диагностикум.
Рис. 13. Завершенный фагоцитоз стафилококка
Рис. 14. Незавершенный фагоцитоз гонококка
Ход реакции: в лунках пластмассовых пластин готовят разведения сыворотки больного от 1:25 до 1:200 в объеме 0,5 мл, в каждую лунку вносят по 2 капли эритроцитарного диагностикума, инкубируют при 370С в течение 2 часов. Положительная реакция характеризуется образованием на дне лунки осадка с неровным краем в виде «зонтика» или «розетки», при отрицательном результате выпадает осадок в виде «пуговки» Диагностический титр 1:100. Контроли – КПС (контроль положительной сыворотки - эритроцитарный диагностикум + сыворотка, содержащая антитела к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа + физиологический раствор); КД – (контроль диагностикума - эритроцитарный диагностикум + физиологический раствор, гемагглютинации не наблюдается).
Дата публикования: 2015-10-09; Прочитано: 707 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!