Определение общего количества микробов в воде

Определение начинают с приготовления разведений во­ды. Для этого в несколько пробирок наливают по 9 мл стерильной воды, В первую пробирку одной стерильной пипеткой добавляют 1 мл исследуемой воды и получают разведение 1:10. После тщательного встряхивания 1 мл воды из этой пробирки переносят во вторую (разведение 1:100), из которой - в третью и т. д.

Для приготовления каждого разбавления пользуются от­дельной стерильной пипеткой. Чем более загрязнена вода, тем больше готовят разведений. Затем в стерильные чашки Петри, слег­ка приподнимая их крышки, вносят по 1 мл из каждого разведения.

При заведомо чистой воде (артезианской, водопроводной) засевают в 2 чашки по 0,5-1 мл неразведенной воды или прибегают к центрифугированию. Для этого берут 15-20 мл воды, центрифу­гируют при частоте вращения 1500 мин в течение 10-15 мин. Верхний слой жидкости отсасывают, оставив в пробирке около 5 мл. Осадок этот, встряхивая, распределяют во всем объеме жидкости и разливают стерильной градуированной пипеткой в стерильные чашки Петри по 0,1-0,2-0,3 и 0,5 мл.

После этого в чашки Петри наливают 10-12 мл расплавлен­ного и охлажденного до 45 °С мясопептонного или суслового агара. Чашки закрывают, смешивают агар с водой и оставляют на столе до застывания агара. Посевы защищают от действия солнечных лучей, закрывая чашки бумагой. На крышках отмечают номера или название пробы и разведение, а также дату посева. Одну чашку поме­щают вверх дном в термостат при температуре 37 °С, а другую - в термостат, где температура 20-22°С, так как в воде могут быть микробы, для которых различна оптимальная температура роста.

По истечении 24 ч роста при температуре 37 °С и 48 ч при температуре 20 °С подсчитывают число выросших колоний в глу­бине и на поверхности агара. Если колоний выросло немного или много мелких колоний, то считают с помощью лупы, повернув чашку вверх дном, отмечая при этом каждую сосчитанную колонию чернилами или карандашом по стеклу. Если выросло большое количество колоний, то дно чашки делят на секторы и подсчет ведут в каждом отдельном секторе.

При очень большом количестве выросших колоний поль­зуются специальной счетной камерой, которая представляет со­бой стеклянную пластинку, разделенную на 144 квадрата, пло­щадь каждого из которых равна 1 см^2. Квадраты, расположенные по диагонали, в свою очередь, делят на 9 малых квадратов каж­дый. Пластинка крепится на деревянной подставке.

Общее количество колоний, выросших на чашке Петри, подсчитывают следующим образом. Определив площадь, чашку с выросшими колониями поме­щают на черное стекло или бумагу вверх дном и покрывают счетной пластиной. Подсчитывают число колоний в 10 квадратах, взятых в разных местах чашки, затем выводят среднее арифметическое для одного квадрата и умножают на площадь чашки.

Если на чашке выросло 50 колоний, а посев был произведен из 0,1 мл воды, то в 1 мл исследуемой воды в данном примере было 500 микробных клеток (считая, что каждая колония выросла из од­ной микробной клетки). Если после центрифугирования из 20 мл оставили 5 мл воды, то в 1 мл воды нужно считать 125 микробных клеток. В том случае, когда воду предварительно разводили, по­лученное число умножают на степень разведения воды. При нали­чии в 1 мл воды от 0 до 100 колоний микробов вода считается чис­той, от 100 до 1000 колоний — сомнительной, от 1000 и более ко­лоний - непригодной для бытового использования.