Алгоритм микробиологического исследования сибирской язвы

Наличие сибирской бациллы в материале от больного определяют микроскопическим и бактериологическим методами. В шерсти, мехе, коже животного выявляют наличие специфического О-антигена, с помощью реакции кольцепреципитации, а также ставят биопробу с белыми мышами.

Материал для исследования: содержимое карбункула, мокрота, кал, кровь.

День первый: микроскопия исследуемого материала (РИФ, окраска по Граму). Первичный посев материала на чашки с МПА и пробирку с МПБ. Термостат 37 градусов Цельсия 18-20 часов.

День второй: просмотр выросших колоний. На МПА крупные колонии в виде «головы медузы». На МПБ осадок в виде комка ваты. Тесты: определение подвижности в висячей капле (неподвижна). Тест «жемчужное ожерелье» на дифференцировку от непатогенных бацилл. У сибироязвенной палочки под действием пенициллина клеточная стенка разрушается и палочки пробретают форму шара.

В специальную жидкую среду добавляют пенициллин и вносят часть колонии на 3 часа при 37 градусах Цельсия. Потом делают мазки, окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. Видна цепь синих шаров (ожерелье). Посев на скошенный МПА для получения ЧК, 37 градусов Цельсия 18-20 часов.

День третий: проверка чистоты культуры (окраска по Граму), идентификация ЧК, посев на ряды Гисса, посев на бульон, посев на желатину (через 2-3 дня разжижение в виде перевернутой елочки), посев на КА (отсутствие зоны гемолиза), проба с сибороязвенным бактериофагом (лизис колоний). Термостат 37 градусов Цельсия 18-20 часов.

День четвертый: учет результатов. Окончательный ответ: выделена сибироязвенная бацилла. При исследовании шерсти, меха, кожи животного для выявления заражения ставят реакцию Асколи, основанную на обнаружении О-антигена в материале с помощью преципитационных сывороток.

Постановка реакции Асколи:

Первый этап: выделение О-антигена из кожи, шерсти или меха животного. Для этого материал измельчают, добавляют физ.раствор, кипятят, фильтруют. Полученный экстракт содержит термоустойчивый О-антиген сибироязвенной палочки.

Второй этап: постановка реакции кольцепреципитации. Берут три преципитационные пробирки: опытная и два контроля. В опытную пробирку наливают противосибироязвенную преципитационную сыворотку и наслаивают равное количество полученного АГ (экстракт). В контроль (пробирка 2) сибироязвенная преципитационная сыворотка и сибироязвенный диагностикум. В контроль (пробирка 3) сибироязвенная преципитационная сыворотка и экстракт шерсти здорового животного. Учет через 3-5 минут по образованию кольца на границе жидкостей. При положительной реакции Асколи — животное больное сибирской язвой. При постановке биопробы материал вводт подкожно белым мышам. Смерть наступает на вторые сутки.

Больного человека можно выявить с помощью кожно-аллергической пробы с антраксином — очищенной белковой фракции сибироязвенной бактерии. Учет через 24-48 часов по покраснению и наличию инфильтрата.