Робота № 73. Приготування середовища Мурісиге і Скуга

Основні відомості. Приготування живильних середовищ вимагає особливої ретельності і послідовності у роботі. Після змішування усіх компонентів (мінеральних солей, вуглеводів, вітамінів і регуляторів росту) у середовище додають воду до потрібного об’єму і доводять рН до 5,6.5,8 (звичайно 1н. КОН). Значення рН середовища впливає на стійкість та засвоєння низки складових середовища. Для більшості рослинних тканин значення рН становить від 5,0 до 6,0, а оптимальне – 5,6…5,8.

Величину рН середовища перед автоклавуванням доводять до 5,5…6,0, оскільки під час автоклавування вона трохи зменшується в результаті утворення цукрових кислот.

За консистенцією середовища бувають тверді, або агарові, і рідкі. Для приготування твердих живильних середовищ використовують агар-агар. Середовища стерилізують автоклавуванням або фільтруванням.

Мета роботи. Приготувати живильне середовище Мурасиге і Скуга (МС) і простерилізувати середовище автоклавуванням.

Матеріали, реактиви, обладнання. Маточні розчини макроі мікросолей, Fe-хелату та вітамінів, мезо-інозит, сахароза, агар, 1 н. HCl і 1н. КОН, ваги, шпателі, магнітний змішувач, рН-метр, плитка, автоклав, склянка або колба місткістю 1 л, мірні циліндри місткістю 500 і100 мл, мірні піпетки на 5 і 1 мл, ватні корки або фольга.

Хід роботи.

1. Для приготування 1 л середовища МС колбу або склянку місткістю 1 л помістити на магнітний змішувач, налити 250...300 мл бідистиляту і додати потрібну кількість розчинів макро- і мікросолей, Fe-хелату, вітамінів і фітогормонів, якщо останні входять до складу середовища.

Для приготування 1 л середовища МС необхідно:

Макросолі	100 мл
Мікросолі	1 мл
Fe-хелат	5 мл
В1	0,1 мг
В6	0,5 мг
РР	0,5 мг
Мезо-інозит	100 мг
Сахароза	30 г (3%)
Агар	7 г

2. Зважити потрібну кількість мезо-інозиту, сахарози і органічних добавок, якщо вони входять до складу середовища. Кожну наважку розчинити в окремій порції бідистильованої води.

3. Довести рН до 5,6.5,8 за допомогою 1н. КОН або 1н. НСl.

4. Наважку агару помістити у термостійку колбу або склянку,налити холодною бідистильованою водою (300.400 мл), залишити на 20 хв. для набухання та нагріти, постійно помішуючи до повного розчинення агару.

Примітка. При приготуванні рідкого середовища агар не додається 5. Додати розчинений агар до рідкого середовища і довести до потрібного об’єму бідистильованою водою. Розчин і воду підігріти.

6. Розлити тепле середовище у колби або пробірки і закрити ватними корками або фольгою.

Примітка. У колби наливаємо середовище до 1/2-2/3 об’єму.

7. Простерилізувати середовище у автоклаві за тиску 0,8…1,0 атм (температура 115...120°С) 20…25 хв. залежно від об’єму (табл. 8.2).

Примітка. Після закінчення стерилізації середовища в автоклаві варто повільно зменшувати тиск в апараті і відкривати кришку лише після того, як внутрішній тиск дорівнюватиме зовнішньому (на манометрі стрілка вказуватиме на 0). Інакше, за різкої зміни тиску середовище може змочити, або навіть виштовхнути корки.

Таблиця. Час стерилізації живильного середовища

Об’єм на посудину, мл	Час стерилізації, за 121 °С (1атм), хв.
20-50
250-500

Контрольні питання

1. Якими є оптимальні межі величини рН середовища для більшості рослинних культур?

2. На які процеси впливає величина рН середовища?

3. Які типи культур особливо чутливі до величини рН?

4. На які типи поділяють середовища залежно від консистенції?

5. Які полісахариди використовують для приготування твердих середовищ?

6. У яких випадках до складу живильного середовища додається активоване вугілля?

7. Назвіть основні способи стерилізації живильних середовищ.