Гель-фильтрация голубого декстрана и витамина В2 (рибофламина) на сефадексе G-25

Задачи работы: изучение разделения смеси веществ методом гель-фильтрации

Оборудование и реактивы: хроматографическая колонка, заполненная грану-

лами сефадексе G-25, смесь голубого декстрана и витамина В₂ (рибофламина), дистиллированная вода, пипетки, штатив с пробирками, стакан.

Выполнение работы: конец пластиковой трубки, отходящей от колонки, опустить в стакан и спустить раствор в колонке до уровня геля. Затем поднять конец трубки выше уровня геля и аккуратно по стенке колонки внести (наслоить) 1 мл разделяемого раствора, стараясь не взмучивать гель. Конец пластиковой трубки поместить в первую пробирку штатива и дать впитаться нанесенному раствору. Затем на поверхность геля осторожно нанести 10 мл дистиллированной воды и последовательно собирать фракции элюата по 2 мл в каждую из 5 пробирок. После сбора последней фракции конец трубки поднять выше уровня геля и закрепить к колонке (на поверхности геля обязательно должен остаться слой воды высотой примерно 1 см).

Порядок оформления работы: записать принцип метода гель-фильтрации, ход работы, зарисовать колонку, объяснить, какой компонент – голубой декстран (молекулярная масса 2 млн) или зеленовато-желтый рибофлавин (молекулярная масса 376,4) элюируется первым? Сделать вывод об эффективности разделения высоко- и низкомолекулярных веществ данным методом.