Постановка опыта

Приготовленный раствор антибиотика немедленно фильтруют по 250 мл через каждый из 4 мембранных фильтров. Фильтры 5 раз отмывают от антибиотика, используя по 100 мл растворителя. Затем фильтры кладут в чашки Петри на следующие среды:

· на МПА с инактиватором – для определения общего количества микроорганизмов. Инкубируют посевы при 37⁰С в течение 3 суток.

· на среду Сабуро – для определения общего количества дрожжевых и плесневых грибов. Инкубируют посевы при 24⁰С в течение 5 суток.

· на среду Эндо с инактиватором для определения бактерий из семейства Enterobacteriaceae. Инкубируют посевы при 37⁰С в течение 3 суток.

· на кровяной агар с инактиватором – для обнаружения S. аureus. Инкубируют посевы при 37⁰С в течение 3 суток, обнаруживают зоны гемолиза вокруг колоний.

Приготовленные из таблеток суспензии по 0,2 мл засевают при помощи шпателя сплошным газоном на поверхность питательных сред параллельно в 3 чашки Петри. Подсчитывают количество выросших колоний. Результаты записывают в протокол и делают заключение (таблица 6).

Таблица 6 – Форма протокола для определения микробной

загрязненности лекарственных средств

Лекарственное средство	Количество микроорганизмов в 1 г препарата
бактерии	плесневые грибы	дрожжевые грибы	патогенные стафилококки	бактерии рода Enterobacteriacea	грамотрицательные палочки, не ферментирующие лактозу на среде Эндо
Заключение

4. Определение стерильности лекарственных средств.

Пирогены.

Для достижения стерильности лекарственных средств (препаратов для инъекций, глазных капель, средств для новорожденных, мазей, пленок) необходимо строго соблюдать режимы стерилизации и санитарные правила изготовления, установленные Государственной фармакопеей или соответствующими техническими условиями.

Стерильные препараты могут содержать продукты деградации микробных клеток, которые вызывают в организме пирогенную реакцию.

Пирогены – это, прежде всего липополисахариды (ЛПС) бактерий, которые освобождаются при их разрушении. При попадании в организм ЛПС взаимодействует с ЛПС-связывающим белком, а затем этот комплекс присоединяется к рецепторам макрофагов. В результате активации макрофага происходит выделение интерлейкина 1, который обладает пирогенным действием и приводит к повышению температуры тела. Содержание в препарате большого количества ЛПС может привести к выделению огромного количества различных медиаторов (ИЛ1, ФНОa и других цитокинов), которые вызывают расширение сосудов, резкое падение артериального давления с развитием шокового состояния.

Предназначенные для инъекций растворы не должны содержать пирогенов. Пирогены термостабильны, проходят через антибактериальные фильтры, в связи с чем не всегда возможно освободить от них готовые лекарственные средства. Поэтому существуют специальные требования к растворам до стерилизации. Так, растворы для инъекций перед стерилизацией не должны содержать более 30 микробных клеток в 1 мл, а время от их изготовления до стерилизации не должно превышать 1,5 часа.

Дистиллированная вода, которая предназначена для изготовления стерильных лекарственных форм, не должна содержать E. coli, а общее микробное число не должно превышать 10 клеток в 1 мл.

Испытания стерильности лекарственных средств проводят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. В боксах работают в стерильных халатах, в специальной стерильной обуви. Боксы обрабатывают несколькими дезинфицирующими растворами, не менее чем за 2 часа до начала работы включают бактерицидные лампы. Регулярно воздух в боксе проверяют на микробную обсемененность методом седиментации. Для этого открывают на 15 минут чашки Петри с МПА и средой Сабуро, затем инкубируют их в термостате при 37⁰С 48 ч. На чашке с МПА допустимым считается рост не более 5 колоний; на среде Сабуро роста плесневых и дрожжевых грибов не должно быть.

При производстве, упаковке, хранении и продвижении готовых лекарственных средств должны быть предприняты меры для обеспечения их микробиологической чистоты.