 |
Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | |
Определение общего количества бактерий
|
|
В две пробирки с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45-500С МПА с 0,1% глюкозой вносят 1 мл препарата, предварительно разведенного 1:10 буфером, быстро перемешивают и выливают в две чашки Петри с 15-20 мл застывшей этой же среды. Равномерно распределяют верхний слой быстрым покачиванием чашки. После застывания агара чашки инкубируют при 370С в течение 5 суток. Затем подсчитывают количество колоний, выросших на двух чашках, определяют среднее арифметическое и высчитывают количество бактерий в 1 г (мл) образца. Причем, чтобы получить достоверные результаты, учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 колоний. Если число колоний более 300, делают ряд разведений (1:100, 1:1000, 1:2000 и т.д.) и засевают наиболее подходящее разведение.
3.3.2. Определение общего количества грибов.
Посевы, как и описанные выше, делают двухслойным агаровым методом. Используют среду Сабуро с антибиотиками. Инкубируют чашки с посевами в течение 5 суток при 240С.
3.3.3. Определение бактерий из семейства Enterobacteriaceae
Делают посев 10 г (мл) образца в 90 мл среды обогащения, перемешивают, инкубируют при 370С 24-48 ч.
При наличии роста пересевают колонии на среду Эндо и висмут-сульфитный агар, инкубируют при 370С 24-48 ч.
Представители семейства Enterobacteriaceae образуют на среде Эндо крупные колонии малинового цвета, с металлическим блеском или без блеска, могут быть розовые или бесцветные, выпуклые, блестящие колонии 2-4 мм в диаметре.
На висмут-сульфитном агаре колонии могут быть черными с металлическим блеском или коричневые, зеленовато-бурые, светло-зеленые и т.п.
Во всех случаях при микроскопировании обнаруживают грамотрицательные палочки без спор. Из отдельных колоний выделяют чистую культуру на скошенном МПА с 0,1% глюкозы, инкубируют при 370С 24 ч.
Идентификацию представителей семейства Enterobacteriaceae проводят по следующим свойствам:
1. При посеве на среду с глюкозой и феноловым красным выявляют ферментацию глюкозы, среда при этом из красной становится желтой.
2. При посеве на среду с нитратом калия и реактивом Грисса обнаруживают восстановление нитратов в нитриты по покраснению среды.
3. Проводят тест на цитохромоксидазу, который у энтеробактерий должен быть отрицательным.
Примечание: Если выделенная культура содержит грамотрицательные палочки, которые ферментируют глюкозу, восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют цитохромоксидазу, делают вывод о наличии в исследуемом образце представителей семейства Enterobacteriaceae.
3.3.4. Определение видов Staphylococcus аureus и Pseudomonas аeruginosa.
В 90 мл среды для накопления вносят 10 г (мл) препарата, инкубируют при 370С 24-48 ч. При наличии роста пересевают культуры на чашки Петри с маннитсодержащим солевым агаром для выделения S. аureus и на ЦПХ-агар – для идентификации P. аeruginosa.
После инкубации при 370С в течение 24-48 ч на солевом агаре с маннитом S. аureus образует золотисто-желтые колонии с зоной помутнения вокруг за счет выделения лецитиназы. При микроскопии мазков из этих колоний обнаруживают грамположительные кокки. С выделенной чистой культурой проводят тест на наличие плазмокоагулазы. Для этого делают посев колоний в пробирки со стерильной цитратной плазмой кролика. S. аureus через 1-24 ч коагулирует плазму.
На ЦПХ-агаре P. аeruginosa образуют зеленоватые флюоресцирующие колонии, которые выделяют в среду растворимый пигмент сине-зеленого цвета, дают положительную пробу на цитохромоксидазу. При микроскопии – грамотрицательные неспоровые палочки.
Дата публикования: 2015-07-22; Прочитано: 303 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!
