Анализ желудочного сока

Задание 1. Провести количественное определение кислотности желудочного сока.

Принцип. Метод базируется на определении кислотных веществ желудочного сока при титровании раствором натрия гидроксида с использованием двух разных индикаторов: п -диметиламиноазобензена (зона перехода окраски при рН= 2,3…4,2) и фенолфталеина (зона перехода окраски при рН=8,2...10,0). По изменению окраски (от красного до оранжевого) индикатора п -диметиламиноазобензена определяется свободная соляная кислота, а по переходу окраски (от бесцветного до розового) фенолфталеина – общая кислотность желудочного сока.

Ход работы. В колбу для титрования вносят 5 мл желудочного сока; прибавляют 1-2 капли 0,5% раствора п -диметиламиноазобензена и 2 капли 0,5% фенолфталеина, титруют 0,1 моль/л натрия гидроксида до появления оранжево-красной окраски и отмечают объем щёлочи (в мл), пошедший на титрование свободной соляной кислоты (I пункт титрования). Продолжают титрование до появления лимонно-желтой окраски (II пункт титрования) и снова отмечают объем щёлочи, пошедший от начала титрования до II пункта титрования. Потом титрование продолжают до появления розовой окраски (III пункт титрования) и отмечают количество щёлочи, пошедшее на титрование от начала до III пункта титрования. За единицу кислотности желудочного сока принимают объем раствора 0,1 моль/л натрия гидроксида (в мл), пошедший на титрование 100 мл желудочного сока. Например: на титрование 5 мл желудочного сока до I титрования израсходовано 1,5 мл раствора 0,1 моль/л натрия гидроксида, тогда количество свободной соляной кислоты составляет: (1,5∙100)/5=30 (ед.).

Для расчета количества связанной соляной кислоты необходимо знать концентрацию общей соляной кислоты. Последнюю определяют на основании данных титрования. Известно, что количество щёлочи, которое необходимо израсходовать на связывание всей соляной кислоты, равняется среднему арифметическому количества щелочи, израсходованного до II и III пунктов титрования. Например, если до II пункта титрования израсходовано 2 мл, а до III - 3 мл щёлочи, то среднее арифметическое составляет 2,5 мл. Отсюда содержание общей соляной кислоты в 100 мл желудочного сока составляет: (2,5∙100)/5=50 (ед.).

Связанная с белками соляная кислота определяется разностью между количеством общей и свободной соляной кислоты: 50-30=20 (ед.).

Кроме того, III титрование служит для определения общей кислотности. Например, если на титрование 5 мл желудочного сока пошло 3 мл раствора 0,1 моль/л натрия гидроксида, то общая кислотность:(3,0∙100)/5=60 (ед.).

Задание 2. Определить наличие молочной кислоты (реакция Уффельмана).

Принцип. Метод базируется на способности молочной кислоты в присутствии феррум (III) фенолята образовывать соль феррума лактата желто-зеленого цвета.

Ход работы. Для приготовления феррум фенолята в пробирку вносят 10 мл 1% раствора фенола и прибавляют к нему 3 капли 1% раствора феррум (III) хлорида. Содержимое перемешивают стеклянной палочкой - развивается фиолетовая окраска. Для проведения реакции в пробирку вносят 2-3 мл полученного реактива и прибавляют 5-6 капель исследуемого желудочного сока; изменение окраски на жёлтое-зеленое свидетельствует о наличии молочной кислоты.

Задание 3. Определить наличие крови (реакция Адлера с бензидином).

Принцип. Реакция базируется на окислении бензидина кислородом, который образуется при разложении гидроген пероксида под действием каталазы крови, с образованием продуктов сине-зеленого цвета.

Ход работы. В пробирку вносят 5 капель нефильтрованного желудочного сока, прибавляют 5 капель свежеприготовленного 1% раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте и 5 капель 3% раствора гидроген пероксида. При наличии крови в желудочном соке при стоянии появляется синяя или зеленая окраска (окисленный бензидин).

Практическое значение. Желудочный сок – почти бесцветная сильно кислая многокомпонентная жидкость: содержит воду (99,4%), в которой растворены ферменты, соляная кислота, мукоиды. Основным неорганическим компонентом является соляная кислота в свободном и связанном с протеинами состоянии. Также в состав входят хлориды, фосфаты, сульфаты, карбонаты натрия, калия, кальция и др. Среди органических соединений - белки, муцин (слизь), лизоцим, ферменты пепсин и ренин, продукты метаболизма. В желудочном соке содержится «внутренний фактор» Касла, который способствует всасыванию витамина B₁₂. Переваривание белков в значительной мере зависит от кислотности желудочного сока. При определении кислотности различают общую кислотность (сумма всех кислотореагирующих веществ), свободную и связанную соляную кислоту. В норме общая кислотность составляет 40-60 ед., содержание свободной соляной кислоты - 20-40 ед., связанной - 5-20 ед. Кислотность желудочного сока при заболеваниях желудка может быть нулевой, пониженной и повышенной. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите происходит увеличение содержания свободной НСl и общей кислотности (гиперхлоргидрия); при гипоацидном гастрите и опухолях желудка наблюдается уменьшение количества свободной НСl и общей кислотности (гипохлоргидрия); при злокачественных новообразованиях желудка, хроническом гастрите может отмечаться полное отсутствие свободной НСl и значительное снижение общей кислотности (ахлоргидрия); при злокачественном малокровии, опухолях желудка наблюдается полное отсутствие соляной кислоты и пепсина (ахилия). Вместе с нормальными составляющими в желудочном соке при ряде заболеваний могут появляться другие вещества: молочная кислота, кровь, жирные кислоты, желчные пигменты. В клинике их часто определяют с помощью специальных реакций. При ахлоргидрии вместе с молочной кислотой образуются жирные кислоты (уксусная, масляная), поскольку под влиянием микроорганизмов в желудке развиваются процессы брожения. Кровь (кровяные пигменты) может появляться в составе желудочного сока при язвах желудка. Желчные пигменты могут поступать в желудок из двенадцатиперстной кишки вследствие рефлюкса.