Исследование методом тонкослойной хроматографии

Исследование проведено в соответствии с методическими рекомендациями «Определение вида наркотических средств, получаемых из конопли и мака» в целях выявления основных опийных алкалоидов в объектах № 1–6, похожих по внешнему виду и органолептическим признакам на опий.

Навески каждого объекта массой по 0,02 г помещали в склянки и заливали каждую 0,2 мл смеси – хлороформ–этанол–25% водный раствор аммиака (1:2:0,1). Содержимое склянок нагревали до начала кипения, снимали нагрев и выдерживали 30 мин при комнатной температуре.

Полученные экстракты в количестве 4 мкл наносили на хроматографическую пластину Kieselgel 60 F 254для высокоэффективной тонкослойной хроматографии (Merck, Германия). На эту же пластину наносили 0,1% спиртовые растворы морфина, кодеина, тебаина, папаверина, наркотина и димедрола в качестве свободных образцов для сравнительного исследования. Хроматографирование проводили в системе толуол–этанол–триэтиламин (9:1:1). После окончания хроматографирования пластину высушивали на воздухе в течение 20 мин. Полученные хроматограммы осматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм, отмечая при этом зоны поглощения флюоренсценции, затем проявляли хроматограммы реактивом Марки.

На хроматограммах экстрактов всех исследуемых веществ выявлены хроматографические зоны со значениями Rf: 0,23 и 0,47, окрашиваемые реактивом Марки, соответственно, в фиолетовый и синий цвета; 0,60, окрашиваемая реактивом Марки в желтый цвет; 0,69, не окрашиваемая реактивом Марки. Выявленные хроматографические зоны совпадают по значению Rf и характеру окрашивания соответственно с зонами морфина, кодеина, тебаина и наркотина на хроматограммах свободных образцов. Папаверин в пределах чувствительности методики исследования не выявлен.

На хроматограмме экстракта объекта № 1, кроме того, выявлена хроматографическая зона со значением Rf 0,66, окрашиваемая реактивом Марки в лимонно-желтый цвет и совпадающая по значению Rf и характеру окрашивания с зоной димедрола (дифенгидрамина) на хроматограмме свободного образца.

Кроме того, проводили фармакопейную пробу на наличие меконовой кислоты в веществах объектов № 1–6 (в соответствии с Государственной Фармакопеей СССР. – 9 изд. – С. 346). Навески массой по 0,01 г исследуемых объектов экстрагировали 1,0 мл дистиллированной воды. К профильтрованным водным экстрактам добавляли по 1 капле 0,1% водного раствора хлорида окисного железа. При этом наблюдали красное окрашивание всех экстрактов, свидетельствующее о присутствии в исследуемых веществах меконовой кислоты.

Таким образом, установлено, что в объектах № 1–6 содержатся основные алкалоиды опийной группы – морфин, кодеин, тебаин, наркотин, а также меконовая кислота (кроме того, в объекте № 1 содержится димедрол (дифенгидрамин)).

Полученные результаты позволяют утверждать, что объекты № 2–6 являются опием. Объект № 1 является смесью опия с димедролом (дифенгидрамином).

Опий включен в Перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации, утвержденный Постановлением Правительства Российской Федерации от 30 июня 1998 г. № 681, и отнесен к наркотическим средствам, оборот которых в Российской Федерации запрещен в соответствии с законодательством и международными договорами Российской Федерации (Список I «Перечня», раздел «Наркотические средства»).

Димедрол (дифенгидрамин) не входит в действующие Списки наркотических средств, психотропных, сильнодействующих, ядовитых веществ и прекурсоров.

Исследование методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Исследование проведено в целях определения количественного содержания основных алкалоидов опийной группы (морфин, кодеин, тебаин, наркотин) в представленных на исследование объектах № 1–6.

Исследование проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на жидкостном хроматографе фирмы «Хью­летт-Паккард» (США) модели 1090 с использованием аналитической колонки ODS Hypersil (длина –100 мм; диаметр – 2,1 мм) с размером частиц 5 мкм. В качестве подвижной фазы применяли смесь: фосфатный буфер – ацетонитрил (градиент – от 95:5 до 80:20); скорость элюирования – 0,250 мл/мин; детектирование на детекторе с диодной матрицей в диапазоне длин волн 192–600 нм; объем вводимой пробы – 5 мкл.

От высушенных (как указано выше) веществ (объекты № 1–6) отбирали по две навески массой около 15 мг каждая, которые взвешивали на весах Sartorius 1602 MP 8 (Германия) с точностью до 0,0001 г и заливали фосфатным буфером с таким расчетом, чтобы концентрация вещества в полученных смесях составляла 3,0 мг/мл. Экстракцию исследуемых веществ фосфатным буфером проводили в течение 30 мин при 20 °С в ультразвуковой ванне. Полученные экстракты фильтровали через мембранный фильтр и анализировали на жидкостном хроматографе в указанных условиях.

Содержание морфина в сухом веществе исследуемых объектов (в масс. %, в пересчете на основание) рассчитывали исходя из значений его концентраций в экстрактах. Концентрацию морфина в экстрактах определяли методом абсолютной градуировки, используя для построения градуировочных графиков растворы морфина c точно известной концентрацией в фосфатном буфере.

Средние значения и их доверительные интервалы содержания морфина в сухом веществе исследуемых объектов (по результатам двух параллельных анализов вещества каждого объекта) представлены в табл. 1.

Таблица 1

Результаты определения содержания морфина
в сухом веществе исследуемых объектов

Объект №	Содержание морфина в сухом веществе объекта, масс. %
	5,9 ± 0,2
	6,9 ± 0,3
	5,8 ± 0,2
	5,9 ± 0,2
	5,9 ± 0,2
	6,8 ± 0,3

Для определения относительного содержания кодеина, тебаина и наркотина в исследуемых объектах использовали метод нормировки площадей. При этом содержание морфина (площадь его пика) во всех случаях принимали за единицу, а относительное содержание кодеина, тебаина и наркотина рассчитывали как отношение площадей их пиков к площади пика морфина. Средние значения и доверительные интервалы полученных величин (по результатам двух параллельных анализов каждого объекта) представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты определения относительного содержания кодеина,
тебаина и наркотина в исследуемых объектах

Объект №	Содержание морфина в объекте, ед.	Содержание кодеина в объекте, ед.	Содержание тебаина в объекте, ед.	Содержание наркотина в объекте, ед.
		0,45 ± 0,02	1,14 ± 0,05	0,48 ± 0,02
		0,42 ± 0,02	1,36 ± 0,05	0,48 ± 0,02
		0,45 ± 0,02	1,35 ± 0,05	0,51 ± 0,02
		0,44 ± 0,02	1,35 ± 0,05	0,51 ± 0,02
		0,45 ± 0,02	1,35 ± 0,05	0,50 ± 0,02
		0,43 ± 0,02	1,36 ± 0,05	0,49 ± 0,02

Из сравнения данных, приведенных в табл. 1, 2, следует, что:

– величины содержания морфина внутри групп объектов № 1, 3–5 и № 2, 6 одинаковы, так как их доверительные интервалы перекрываются;

– величины относительного содержания кодеина и наркотина для объектов № 1–6 одинаковы, так как их доверительные интервалы перекрываются;

– величины относительного содержания тебаина для объектов № 2–6 одинаковы, так как их доверительные интервалы перекрываются, но отличаются от объекта № 1.

Таким образом, в результате исследования, проведенного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, установлено, что:

– вещество (объект № 1), изъятое у гр. С. 29.02.00 г., отличается от веществ (объекты № 2–6), изъятых у гр. С. и гр. Ш. 18.03.00 г., по содержанию тебаина;

– вещество (объект № 2), изъятое у гр. С. 18.03.00 г., и вещество (объект № 6), изъятое у гр. Ш. 18.03.00 г., однородны по количественному содержанию основных опийных алкалоидов (морфин, кодеин, тебаин, наркотин).