Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | ||
|
Принцип метода. Вещества, усиливающие действие Ферментов, называются активаторами. Вещества с противоположным действием — ингибиторы. Активность амилазы слюны усиливается в присутствии хлористого натрия — специфического активатора амилазы. Сернокислая медь оказывает тормозящее действие на активность амилазы.
Реактивы: слюна в разведении 1:3; крахмал, 1 % раствор; раствор Люголя; хлористый натрий, 1 % раствор; сернокислая медь, 1 % раствор.
Ход работы: В три пробирки приливают по 3 мл раствора слюны в разведении 1:3. В первую пробирку добавляют 1 каплю 1 % раствора хлористого натрия, во вторую — 1 каплю 1% раствора сернокислой меди, в третью — 1 каплю воды. После этого в каждую пробирку приливают по 5 капель 1% раствора крахмала. Все пробирки оставляют при комнатной температуре на 3—5 минут. С содержимым каждой пробирки проделывают реакцию на крахмал, приливая по 1 капле раствора йода в йодистом калии. Записывают результаты опыта и делают выводы.
4. Активность α-амилазы слюны (количественное определение).
Принцип метода. Метод основан на определении наименьшего количества амилазы (при максимальном разведении слюны), полностью расщепляющего весь добавленный крахмал. Амилазная активность слюны выражается количеством 0,1% раствора крахмала в миллилитрах, которое расщепляется 1 мл неразведенной слюны при температуре 38°С в течение 30 минут. В норме амилазная активность слюны равна 160—320. Амилазная активность обозначается А 380/30’. Этот метод широко используется для определения амилазной активности крови и мочи.
Реактивы: крахмал 0,1% раствор; раствор Люголя; слюна в разведении 1:9.
Ход работы: В 10 пробирок наливают по 1 мл воды и в первую из них добавляют 1 мл разведенной в 10 раз слюны. Содержимое этой пробирки перемешивают, несколько раз втягивая и выпуская жидкость из пипетки. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят ее во вторую пробирку. Содержимое этой пробирки перемешивают и 1 мл смеси переносят в третью и т.д. до 10-ой пробирки. Из 10-й пробирки отбирают 1 мл смеси и выливают. Во все пробирки наливают 1 мл воды и по 2 мл 0,1% раствора крахмала, перемешивают, встряхивают пробирки и помещают в термостат при 380С на 30 минут, после инкубации пробирки охлаждают водопроводной водой, добавляют по 1 капле раствора йода и перемешивают. При реакции с йодом жидкость в пробирках окрашивается в желтоватый, розовый и фиолетовый цвет. Отмечают последнюю пробирку с желтоватой окраской, где гидролиз крахмала прошёл полностью. И делают расчёт, полученные данные заносят в таблицу.
Номер пробы | Разведение | Окраска раствора с йодом | Выводы |
1:20 | |||
1:40 | |||
1:80 | |||
1:160 | |||
1:320 | |||
1:640 | |||
1:1280 | |||
1:2560 | |||
1:5120 | |||
1:102040 |
Расчёт. Отметив пробирку, где гидролиз крахмала прошёл полностью при наименьшем количестве фермента, по количеству не разведенной слюны в данной пробирке рассчитывают амилазную активность слюны по следующей пропорции:
А мл слюны расщепило 2 мл 0,1% раствора крахмала,
1 мл слюны расщепил Х мл 0,1 % раствора крахмала,
где А – количество неразведенной слюны.
Например, желтоватая окраска появляется в 4-й пробирке, где слюна была разведена в 160 раз; 1/160 мл слюны расщепила 2 мл 0,1% раствора крахмала; 1 мл неразведенной слюны расщепил Х мл 0,1% раствора крахмала: Х=2*1*160/1=320 мл 0,1% раствора крахмала.
Следовательно, амилазная активность слюны А 380/30’ равна 320.
Вопросы для самоконтроля:
1. Какие вещества называются ферментами? Каковы их химическая природа и свойства?
2. Что такое специфичность действия ферментов и как она определяется?
3. Как зависит активность ферментов от температуры и величины рН среды?
4. Какие вещества называют активаторами и ингибиторами ферментов? Приведите примеры.
5. Какие качественные и количественные методы используют для изучения действия ферментов?
6. Какую реакцию катализирует амилаза, сахараза?
7. Единицы ферментативной активности. Каким способом выражается активность амилазы в данной работе?
Дата публикования: 2015-04-10; Прочитано: 2506 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!