Методы выделения чистой культуры аэробных бактерий

Посевы на анаэробную микрофлору, как спорообразующую (клостридии), так и особенно неспорообразующую (вейлонеллы, бактероиды, пептококки), производят в строго анаэробных условиях. Первоначальные посевы делают на обогатительные среды типа Китта—Тароцци, затем пересевают на плотные cpejjbi: сахарный кровяной агар в чашки Петри, в пробирки с сахарным питательным агаром или другими средами для получения изолированных колоний. После инкубации посевов в анаэробных условиях из образовавшихся колоний бактерий готовят мазки, окрашивают, микроскопируют, а затем пересевают на среду Китта—ТароЦци и агаровые среды для выделения чистой культуры.

При выделении спорообразующих анаэробных ' бактерий (клостридии) первоначальные посевь/ прогревают на водяной бане при 80°с в течение 20 мин для уничтожения вегетативных клеток посторонней микрофлоры, которая может присутствовать в исследуемом материале (схема 1).

Идентификация бактериальной культуры

Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путем изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, которые присущи каждому виду.

Культуральные признаки. К ним относятся морфологические особенности колоний бактерий, характер роста на плотных и в жидких питательных средах.

Колонии различаются по величине, форме, цвету, консистенции, контуру края, структуре и характеру поверхности (рис. 29). По величине колонии могут быть крупные (диаметр более 4—5 мм), средние (2—4 мм) и малые (1—2 мм), по форме — круглые, розеткообразные, в форме листа и т. д. Цвет колонии зависит от выработки определенного пигмента—белого, желтого, красного и др. Колонии беспитментных бактерий бесцветны. По консистенции различаются сухие, влажные, сочные или слизистые колонии. Поверхность колонии "бывает гладкой, морщинистой, исчерченной, плоской, плосковыпуклой, вдавленной Край колонии может быть ровным, волнистым, бахромчатым'. Колонии могут иметь аморфную, зернистую, волокнистую внутреннюю структуру.

Характер роста бактерий в чистой культуре, выращенной на скошенном питательном агаре, может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным. В жидкой питательной среде одни бактериальные культуры дают диффузное помутнение, другие характеризуются придонным, пристеночным ростом; некоторые культуры образуют пленки на поверхности среды, другие — осадок на дне пробирки.

Биохимические признаки. Для определения способности микроорганизмов ферментировать углеводы (сахаролитические свойства) используют короткий и длинный «пестрый» ряд. К первому относятся жидкие среды Гисса с моно- и дисаха-ридами: глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с шестиатомным спиртом — маннитом. В длинный «пестрый» ряд наряду с перечисленными углеводами вводят среды с разнообразными моносахаридами (арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза и др.), полисахаридами (инулин, крахмал, гликоген и др.) и спиртами (глицерин, дульцит, инозит и др.). В качестве индикатора ко всем средам добавляют реактив Андреде или BP.

Чистую культуру исследуемого микроба засевают петлей в среды «пестрого» ряда. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18—24 ч или более длительно. В том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды: при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляется пузырек газа в поплавке. Если используются среды с полужидким агаром, то образование газа регистрируется по разрыву столбика. При отсутствии ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют ■не все, а только определенные для каждого вида углеводы, входящие в состав сред Гисса, наблюдается довольно пестрая картина, поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором называют «пестрым» рядом (рис. 30).

Для определения протеолитических ферментов производят посев культуры бактерий уколом в столбик 10—20% желатина, пептонную воду. Посевы в желатине инкубируют при 20—22°С в течение нескольких дней. При наличии протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, причем в этом месте образуется фигура, напоминающая воронку или елочку.

В посевах в пептонную воду определяют продукты расщепления пептона после инкубирования в течение 2—3 сут при 37° С —ставят реакции на аммиак, индол, сероводород и др.