Аффинная хроматография, или хроматография по сродству

Это наиболее специфичный метод выделения индивидуальных белков, основанный на избирательном взаимодействии белков с лигандами, прикреплёнными (иммобилизированными) к твёрдому носителю. В качестве лиганда может быть использован субстрат или кофермент, если выделяют какой-либо фермент, антигены для выделения антител и т.д. Через колонку, заполненную иммобилизованным лигандом, пропускают раствор, содержащий смесь белков. К лиганду присоединяется только белок, специфично взаимодействующий с ним; все остальные белки выходят с элюатом. Белок, адсорбированный на колонке, можно снять, промыв её раствором с изменённым значением рН или изменённой ионной силой. В некоторых случаях используют раствор детергента, разрывающий гидрофобные связи между белком и лигандом.

Аффинная хроматография отличается высокой избирательностью и помогает очистить выделяемый белок в тысячи раз.

Для количественного определения белков применяют физико-химические, химические и биологические методы.
Наибольшее распространение из физических методов получили рефрактометрический, спектрофотометрический и поляграфический.
Для количественного анализа белков можно использовать, например, определение белкового азота. Для этого пробу сжигают при высокой температуре в присутствии серной кислоты и перекиси водорода (окислитель). Происходит минерализация, при этом азот в форме аммиака связывается с серной кислотой (сульфат аммония). Количество сульфата аммония определяют или реактивом Несслера, или после перегонки аммиака титрометрически.
Самым распространенным из физико-химических методов определения белков является колориметрический метод. Он основан на изменения интенсивности окрашивания цветной реакции, развивающейся при взаимодействии белков со специфическим реагентом, в зависимости от концентрации белка.
Среди колориметрических методов, основанных на известных цветных реакциях на белок, широкое распространение получил наиболее чувствительный метод Лоури. Несмотря на высокую чувствительность, он имеет определенные недостатки, так как используемый в этом методе реактив Фолина дает положительную реакцию и на некоторые другие вещества, например, вещества фенольной природы, которые содержатся в большом количестве в некоторых объектах, особенно в растительных белках.
Более надежные и воспроизводимые результаты получаются при использовании биуретового метода. Этот метод уступает по чувствительности методу Лоури, но не дает побочных реакций с отличающимися от белка веществами. В его основе лежит явление образования фиолетового окрашивания при добавлении щелочного раствора меди (II) к белку. Окрашивание вызывается наличием в белке пептидных связей, что обеспечивает специфичность реакции.