Окраска по Граму

Дифференциация микроорганизмов на Грам положительные и Грам отрицательные основано на различии строения клеточной стенки. У Грам положительных микроорганизмов в клеточную стенку входит многослойный пептидогликан, с которым связаны тейхоевые кислоты. Этот комплекс образует прочное соединение с генцианвиолетом, не разрушающееся при воздействии спирта 96º.

У Грам отрицательных микроорганизмов пептидогликан однослойный, тейхоевых кислот мало, больше фосфолипидов и липопротеидов, что создает непрочное соединение с генцианвиолетом, окрашиваясь дополнительным красителем — фуксином. Используемые красители: карболово-спиртовой генцианвиолет, фуксин Пфейффера. Протравка — раствор Люгеля. Дифференцирующее вещество — 96º этиловый спирт.

Грам положительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет — стафилококки, стрептококки, пневмококки.

Грам отрицательные окрашиваются в малиновый цвет — менингококки, гонококки.

Этапы окраски

1. На препарат кладут фиолетовую бумажку по Синёву и сверху наносят несколько капель физраствора. Окрашивают 1-2 мин.

2. Снять пинцетом бумажку с препарата, слить в лоток избыток краски

3. Не промывая препарат водой, нанести несколько капель раствора Люголя и держать до почернения препарата примерно 1 минуту.

4. Не промывая препарат водой, нанести сверху раствор 96º этилового спирта; держать до отхождения красителя

5. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой

6. Докрасить фуксином Пфейффера — 3 минуты

7. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой.

Самостоятельная работа:

1. Приготовить 2 препарата из микробной культуры.

2. Окрасить простым способом (м/с) и сложным по Граму

3. Провести иммерсионную микроскопию, зарисовать.

Занятие №4 «Изучение шаровидных форм бактерий. Окраска по Бури-Гинсу и Ожешко»

План занятия

1. Морфологические особенности шаровидных форм бактерий.

2. Тинкториальные свойства шаровидных форм бактерий

3. Окраска по Бурри-Гинсу и Ожешко

Знать

1. Морфологические структуры, размеры шаровидных форм бактерий

2. Микроскопию шаровидных форм

3. Методики окраски по Бурри-Гинсу и Ожешко

Уметь

1. Провести микроскопию демонстрационных препаратов шаровидных форм бактерий, зарисовать

2. Приготовить препарат из капсульных бактерий, окрасить по Бурри-Гинсу

3. Провести микроскопию, зарисовать

4. Приготовить препарат из споровой культуры, окрасить по Ожешко, провести микроскопию, зарисовать.

Шаровидные бактерии — кокки имеют средний диаметр около 1 мкм. В зависимости от их расположения в мазке, что определяется характером деления клеток, патогенные кокки подразделяются на локки (двойной), стрептококки (цепочечный) и стафилококки (виноградная гроздь). Диплококки и стрептококки делятся в одной плоскости, но остаются соединенными цитоплазматическими мостиками. К диплококкам относятся:

1. Пневмококки — диплококки ланцетовидной формы

2. Менингококки — диплококки бобовидной формы

3. Гонококки — диплококки бобовидной формы.

Стафилококки делятся в двух плоскостях и образуют скопления клеток, напоминающие грозди.

Непатогенные кокки располагаются беспорядочно (микрококки) тетрадами и пакетами по 8-16 особей (сарцины). Тетракокки и сарцины делятся в двух-трех плоскостях.

Спор и жгутиков патогенные кокки не образуют. Капсулы имеют только некоторые кокки, например пневмококки.

Тинкториальные свойства.

Гр +: стафилококки, стрептококки, пневмококки

Гр -: менингококки, гонококки