Колоночная жидкостная хроматография

В колоночной жидкостной хроматографии сорбент находится в стеклянной или металлической трубке (колонке).

В классическом варианте колоночной хроматографии используются сорбенты с диаметром частиц более 100 мкм. Колонка может иметь длину до нескольких метров. Элюент продвигается по колонке под действием силы тяжести.

В высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) используются сорбенты, обладающие особыми свойствами (однородность частиц, ненабухаемость и т.д.). Диаметр частиц этих сорбентов не превышает 50 мкм. Часто в ВЭЖХ применяют сорбенты с различными привитыми группами (см. рис. 24.1). Скорость движения подвижной фазы и эффективность разделения в ВЭЖХ значительно выше, чем в классическом варианте хроматографии.

24.3.1. Устройство жидкостного хроматографа

Основные узлы жидкостного хроматографа показаны на рис. 24.5.

Рис. 24.5. Принципиальная схема жидкостного хроматографа

Подвижная фаза подаётся в колонку с помощью насоса. Блок подачи элюента может включать в себя также систему дегазации, устройство для градиентного элюирования, измерители давления. До попадания в насос подвижная фаза должна быть профильтрована и освобождена от растворённых в ней газов (“дегазирована”), так как пузырьки газа при попадании в колонку приводят к снижению её эффективности, а при попадании в детектор вызывают беспорядочные колебания нулевой линии.

Ввод пробы в жидкостный хроматограф может проводиться с помощью петлевого дозатора, микрошприца (роль шприца может выполнять сам насос) и др.

Хроматографические колонки в ВЭЖХ, в отличие от газохроматографических колонок, прямые. Они имеют длину 10 - 30 см и внутренний диаметр 4 - 6 мм, а в микроколоночных хроматографах, соответственно, 5 - 7 см и 1-2 мм. Корпус колонки представляет собой цилиндрическую трубку, изготовленную из стекла, нержавеющей стали или полимерного материала. На верхнем и нижнем концах колонки расположены фильтры, представляющие собой диски из пористой нержавеющей стали. Назначение фильтров – удерживание сорбента в колонке и задержка механических примесей, которые могут находиться в подвижной фазе.

В табл. 24.3 перечислены детекторы, наиболее часто используемые в ВЭЖХ.

Табл. 24.3

Характеристика некоторых детекторов, используемых в

жидкостных хроматографах

Детектор	Измеряемый сигнал	Определяемые вещества
дифференциальный рефрактометр	разность показателей преломления элюата и элюента	универсальный
УФ-детектор с фиксированной длиной волны (254 нм)	разность между поглощением элюата и элюента при 254 нм	вещества, поглощающие электромагнитное излучение с длиной волны 254 нм
спектрофотометрический	разность между поглощением элюата и элюента при выбранной длине волны	вещества, поглощающие излучение с выбранной длиной волны
флуоресцентный	интенсивность испускаемого света	вещества, обладающие флуоресценцией
кондуктометрический	низкочастотная электропроводность элюата	ионы
потенциометрический	разность потенциалов ионо-селективного электрода и электрода сравнения	ионы
вольтамперометрический	сила тока при постоянном потенциале электродов	вещества, способные к электрохимическому окислению или восстановлению