V. Очи­ст­ка бел­ков

Ин­ди­ви­ду­аль­ные бел­ки, по­лу­чен­ные в ре­зуль­та­те раз­де­ле­ния бел­ко­вых сме­сей, обыч­но со­дер­жат мно­же­ст­во низ­ко­мо­ле­ку­ляр­ных при­ме­сей. Очи­ст­ка бел­ков от них мо­жет осу­ще­ст­в­лять­ся диа­ли­зом, элек­тро­диа­ли­зом, ульт­ра­фильт­ра­ци­ей, кри­стал­ли­за­ци­ей, пе­ре­кри­стал­ли­за­ци­ей и др. спо­со­ба­ми.

1) Диа­лиз рас­тво­ра бел­ка про­во­дят в спе­ци­аль­ном при­бо­ре – диа­ли­за­то­ре, ра­бо­чая часть ко­то­ро­го со­сто­ит из кол­ло­дие­во­го диа­ли­за­ци­он­но­го ме­шоч­ка, омы­вае­мо­го дис­тил­ли­ро­ван­ной во­дой. Диа­ли­за­ци­он­ный ме­шо­чек все­гда снаб­жа­ют ка­пил­ляр­ной труб­кой, по­сколь­ку во вре­мя диа­ли­за про­ис­хо­дит уве­ли­че­ние объ­е­ма бел­ко­во­го рас­тво­ра. Диа­лиз в диа­ли­за­то­ре про­во­дят в те­че­ние не­сколь­ких ча­сов или не­сколь­ких су­ток. Че­рез мел­кие по­ры в кол­ло­дие­вом или цел­ло­фа­но­вом ме­шоч­ке из бел­ко­во­го рас­тво­ра вы­хо­дят низ­ко­мо­ле­ку­ляр­ные при­ме­си, то­гда как круп­ные мо­ле­ку­лы бел­ка ос­та­ют­ся на мес­те.

Бо­лее эф­фек­тив­ным спо­со­бом очи­ст­ки бел­ка яв­ля­ет­ся элек­тро­диа­лиз. При­чем, при­ме­ня­ет­ся он ча­ще все­го не как ин­ди­ви­ду­аль­ный спо­соб очи­ст­ки, а как до­пол­не­ние к обыч­но­му диа­ли­зу.

2) Элек­тро­диа­лиз. При­бор для про­ве­де­ния элек­тро­диа­ли­за бо­лее сло­жен. Для не­го ис­поль­зу­ет­ся не обыч­ный диа­ли­за­ци­он­ный ме­шо­чек, а со­суд, бо­ко­вые стен­ки ко­то­ро­го вы­пол­не­ны из по­лу­про­ни­цае­мых мем­бран. Па­рал­лель­но бо­ко­вым стен­кам со­су­да для элек­тро­диа­ли­за по­ме­ща­ют элек­тро­ды, на ко­то­рые по­да­ют по­сто­ян­ный элек­три­че­ский ток. В ре­зуль­та­те это­го ос­тат­ки ио­нов, со­дер­жа­щих­ся в бел­ко­вом рас­тво­ре, про­шед­шем пред­ва­ри­тель­ный диа­лиз, уст­рем­ля­ют­ся к со­от­вет­ст­вую­щим элек­тро­дам (в за­ви­си­мо­сти от сво­его за­ря­да), и бел­ко­вый рас­твор окон­ча­тель­но очи­ща­ет­ся.

Вы­со­ко­проч­ные по­лу­про­ни­цае­мые мем­бра­ны так­же ис­поль­зу­ют­ся и в дру­гом спо­со­бе очи­ст­ки бел­ков – ульт­ра­фильт­ра­ции.

3) Ульт­ра­фильт­ра­ция – спо­соб очи­ст­ки бел­ков, ис­поль­зую­щий про­дав­ли­ва­ние бел­ко­во­го рас­тво­ра че­рез вы­со­ко­проч­ную по­лу­про­ни­цае­мую мем­бра­ну с по­мо­щью сжа­то­го га­за или цен­тро­беж­ной си­лы. При этом во­да и низ­ко­мо­ле­ку­ляр­ные со­еди­не­ния про­хо­дят че­рез мем­бра­ну, а бе­лок ос­та­ет­ся на мем­бра­не в ви­де кон­цен­три­ро­ван­но­го рас­тво­ра.

4) Очи­ст­ка кри­стал­ли­за­ци­ей про­во­дит­ся из со­ле­вых бел­ко­вых рас­тво­ров мед­лен­ным ис­па­ре­ни­ем во­ды до точ­ки вы­са­ли­ва­ния бел­ка. Пер­вые два бел­ка, по­лу­чен­ных в кри­стал­ли­че­ском со­стоя­ния, бы­ли ок­си­да­за (1906 г, А.Д. Ро­зен­фельд) и уреа­за (1926 г., Д. Сам­нер).

Кри­стал­ли­за­ция яв­ля­ет­ся так­же ме­рой чис­то­ты бел­ка, по­сколь­ку толь­ко очень чис­тый ин­ди­ви­ду­аль­ный бе­лок спо­со­бен к кри­стал­ли­за­ции.