Бордетеллы. Микробиологическая диагностика коклюша

Род Bordetella включает 3 вида, патогенных для человека: В.pertussis (возбудитель коклюша), В.parapertussis (паракоклюш) и В.bronchiseptica (возбуди­тель бронхисептикоза). Жгутики из них имеет только В.bronchiseptica, образуют уреазу и растут на простом кровяном агаре (кроме В.pertussis), агглютинируется сыворотками к АГ: В.parapertussis – 1, В.parapertussis – 14, В.bronchiseptica – 12.

BORDETELLA PERTUSSIS – был выделен Борде и Жангу. Коклюш – острое инфекционное заболевание с приступами спазмати­ческого кашля.

Морфология. Небольшие гр– неподвижные коккобактерии. Спор не образуют, имеют небольшую капсу­лу, строгие аэробы, требовательны к пит средам (должны содержать АК (как фактор роста), кровь, адсорбент ЖК, которые тормозят размножение этих бактерий (древесный уголь или ионообменные смо­лы)). Обычно культивируют на картофельно-глицериновом агаре с до­бавлением крови, на кровяном агаре и на полусинтетическом КУА без крови. Мелкие, круглые, блестящие как капельки ртути коло­нии появляются через 48–72ч. На кровяном агаре наблюда­ется гемолиз. Свежевыделенные культуры образуют S-формы колоний, после пересевов – R-форма.

БХ активность сла­бая: не расщепляют белки и углеводы, не восстанавливают нитриты, образуют каталазу.

АГ. У бордетелл выявлены: 14 Аг (агглютиногенов), из которых 7-й является родовым, общим для всех видов, а другие либо только видовые (1 – В.pertussis, 14 – В.parapertussis, 12 – В.bronchiseptica), либо в разных ком­бинациях встречаются у представителей рода; + гемагглютинин, протективный АГ.

Экология и распространение. Обитают в ВДП чка - больного или носителя. Попадая в окружающую среду, быстро погибают. Прямой солнечный свет, УФ, высокие и низкие t°С, высыхание, дезинфицирующие вещества не переносят.

Заражение происходит от больного, который заразен в КАТАРАЛЬНОМ периоде и в течение 1–1,5 мес болезни. ПУТЬ – воздушно-капельный.

Патогенность. Имеет токсические и сенсибилизирующие вещества: филаментозный гемагглютинин (поверхностный белок, обеспечивает адгезию к ## эпит ВДП), трахеальный цитотоксин (вызывает деструкцию ресничек, подавляет имм ответ), аденилатциклаза (подавляет имм/реактивность), дермонекротический токсин, коклюшный токсин (экзотоксин, участвует в адгезии, тормозит фагоцитоз), эндотоксин (ЛПС # стенки), гемолизины и др.

Основной токсин, вызывающий раздражение нервных рецепторов слизистой дыхательных путей → КАШЕЛЬ. Всасываясь в кровь, оказывает возбуждающее действие на ДЦ и вызывает спазм мелких бронхов.

Иммунитет стойкий, повторные заболевания не регистрируются. В течение болезни синтезируются АТ – определяют­ся в РА, РП, РСК. Эти антитела обнаруживаются и у переболевших коклюшем.

Лаб диагностика подтверждает и дифференцирует это заболевание от сходных паракоклюша и бронхисептикоза. Основным методом диагностики на ранних ста­диях заболевания является бактериологический, в позднем пе­риоде применяют серодиагностику.

Материал для БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО исследования – отделяемое слизистой оболочки носоглотки, взятое спец тампоном. В поздних стадиях и при стертых формах в сыворотке крови больных определяют АТ в РА, РНГА, РСК. Для экспресс-диагностики применяют ИФА.

Профилактика и лечение. Для специфической профи­лактики применяется АКДС, коклюшный компо­нент – убитые бордетеллы. Вакцину вводят троекратно детям, начиная с 3-месячного возраста по схеме. Для лечения используют противококлюшный Ig (на ранних стадиях), а также антибиотики.

9. Микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулёза.

МИКОБАКТЕРИИ Род Mycobacteriurn (сем. Mycobacteriaceae, порядок Actinomycetales) включает более 100 видов, широко распространенных в природе. Большая часть – сапрофиты и условно-патогенные. У человека вызывают туберкулез (М.tuberculosis – в 92% слу­чаев, М.bovis - 5%, М.africanus – в 3%) и лепру (М.lерrае).

М.TUBERCULOSIS – Туберкулез – хроническое инфекционное заболевание. В за­висимости от локализации выделяют туберкулез органов дыхания и внелегочные формы (кожи, костей и суставов, почек и др). Локализация зависит от путей проникновения и вида возбудителя.

Морфология. Гр+ прямые или слегка изогнутые палочки. Высокое содержание липидов придает ряд характерных свойств → устойчивость к кислотам, щелочам и спирту, трудное восприятие анилиновых красителей (для окраски применяют метод Циля–Нильсена). В культурах встречаются зернистые формы, ветвящиеся, зерна Муха (шаровидные кислотоподатливые, легко окрашивающиеся по Гр). Возможен пере­ход в L-формы. Неподвижны, спор и капсул не образуют.

Для размножения используют сложные пит среды, содержащие яйца, глицерин, картофель, Vt. Стимулируют рост мико­бактерий асп, соли NН₄, альбумин, глю­коза, твин-80. Чаще всего применяют среду Левенштейна–Йенсена (яичная среда с добавлением картофельной муки, глице­рина и соли) и среду, содержащ асп, глицерин, цитрат Fe, фосфат калия. Размножаются медленно. Период генерации длителен – деление ## в оптимальных условиях 1 раз в 14–15ч. Первые признаки роста обнаруживаются через 8–10 дней после посева. Затем на плотных средах появляются морщинистые, сухие с неров­ными краями колонии. В жид­ких средах – сначала нежная пленка на поверхности, затем утолщается и падает на дно. Среда при этом остает­ся прозрачной.

АГ → Бел­ковые, ПС и липидные соединения. АТ образуются на туберку­линовые протеиды, на ПС, фосфатиды, корд-фактор. Специфичность АТ определяется в РСК, РНГА, преципитации в геле. АГ состав М.tuberculosis, М.bovis, M.leprae и других микобак­терий (включая многие сапрофитические виды) сходен. Туберкулиновый протеин (туберкулин) обладает выраженными аллергенными свойствами.

Экология и распространение. В естественных условиях М tuberculosis вызывает туберкулез у человека, человекооб­разных обезьян. Из лаб Ж!! высокочувствитель­ными являются морские свинки, менее – кролики. К М.bovis – возбудитель туберкулеза у КРС, свиней и человека – высокочувствительны кролики и менее – морские свинки. М.africanus вызывает туберкулез в странах Африки. ПУТЬ заражения воздушно-капельный, возбудитель проникает через ВДП, иногда через слизистые обо­лочки ЖКТ или через поврежденную кожу.

В окр среде длительное время сохраняются (в высохшей мокроте – в течение нескольких недель, в воде – более года).

К действию дезинфицирующих веществ более устойчивы, чем другие Б! Þ требуются более высокие концентрации и более длительное вр воздействия. При кипячении погибают мгновенно, чувст­вительны к УФ.

Патогенез. ИСТОЧ­НИК – люди и животные с активно протекающим туберкулезом, с наличием воспалительных и деструктивных изменений, выделяющие микобактерии. В зоне проникновения и размножения возникает воспали­тельный очаг (первичный эффект – инфекционная гранулема), наблюдаются сенсибилизация и специфический воспалительный процесс в регионарных лимфоузлах – формируется первичный туберкулезный комплекс. При доброка­чественном течении болезни первичный очаг может рассасывать­ся, пораженный участок кальцинироваться и рубцеваться. Но этот процесс не завершается полным освобождением от возбудителя. В лимфоузлах и других органах туберкулезные бактерии сохраняются много лет, иногда в течение всей жизни. Такие люди, с одной стороны, обладают иммуните­том, а с другой – остаются инфицированными.

При сниженной сопротивляемости Ò первичный туберкулезный процесс генерализуется. Диссеминация приводит к образо­ванию в различных органах туберкулезных очагов. Характерна интоксикация. При генерализации – пора­жение органов МП системы, костей и суставов, мозго­вых оболочек, глаз.

Не синтезируют экзотоксин. Поражение тка­ней вызывает ряд веществ – липиды, мураминдипептид, фтионовые кислоты, сульфатиды, туберкулин → специфические гранулемы и по­ражение тканей. Токсическое действие оказывает гликолипид, так называемый корд-фактор, разрушает митохондрии кле­ток, нарушает функцию дыхания.

Патогенетически важным является действие на организм инфицированного человека туберкулина. Очищенный от примесей туберку­лин (PPD – очищенный протеиновый дериват) является белком. Внутрикожное введение туберкулина вызывает у инфициро­ванных людей местную воспалительную реакцию в виде инфильтрата и покраснения (реакция Манту). Неинфици­рованные люди реакции на туберкулин не дают. Эту пробу применяют для выявления инфицированных, сен­сибилизированных людей.

Иммунитет. Заражение не всег­да приводит к развитию заболевания, это зависит от состояния МКÒ. Восприимчивость усиливается в неблагоприятных условиях (изнурительный труд, недостаточное и не­полноценное питание, плохие жилищные условия и т.д.). Способствуют развитию туберкулезного процесса и эндоген­ные факторы – сахарный диабет; психические болезни и др. Значение АТ в формировании сопротивляемости к туберкулезной инфекции до сих пор неясно. Считается, что АТ являются «свидетелями» иммунитета и не оказывают ингибирующего действия на возбудитель.

Большое значение имеет клеточный иммунитет. По РБТЛ, цитотоксическому действию лимфо­цитов на клетки-«мишени», содержащие АГ микобактерии, выраженности РТММ судят о течении заболевания. Т-лимфоциты после контакта с АГ синтези­руют медиаторы, усиливающие фагоци­тарную активность МКфагов. При подавлении функции Т-лимфоцитов туберкулезный процесс становится быстро­течным и тяжелым.

Микобактерии туберкулеза разрушаются внутриклеточно в МКфагах. Фагоцитоз является одним из механизмов, приводящих к освобождению Ò от микобактерии туберкулеза, но он часто незавершенный.

Другой важный механизм – фиксация микобактерий в очагах благодаря об­разованию инфекционных гранулем при участии Т-лимфоцитов, МКфагов и других клеток. В этом проявляется защитная роль ГЗТ.

Иммунитет при туберкулезе раньше называли нестерильным. Значение имеет не только сохранение живых бактерий, поддерживающих повышенную сопротивляемость к суперинфекции, но и явление «иммунологической памяти». При туберкулезе развивается реакция ГЗТ.

Диагностика бактериоскопический, бактериологический и биологический мето­дами. Иногда используются аллергологические пробы. В материале обнаруживают микобактерии туберкулеза пу­тем микроскопии мазков, окрашенных по Цилю – Нильсену и с применением люминесцентных красителей. БАКТЕРИОСКОПИЯ – ориентировочный метод.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ – основной. Культуры идентифицируют, определяют чув­ствительность к АБ.

Применяют ускоренные ме­тоды обнаружения микобактерий в посевах, например по методу Прайса. Микроколонии позволяют увидеть и наличие корд-фактора, когда образовавшие его бактерии складываются в косы, цепочки, жгуты.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ – если воз­будителя трудно выделить из материала (при диагностике туберкулеза почек из мочи). Материалом заражают лабораторных Ж!! (морских свинок – М.tuberculosis, кроликов – М.bovis). Наблюдение ведут в течение 1–2 мес до гибели животного. С 5–10-го дня можно исследовать пунктат лимфоузла.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ ПРОБЫ – туберкулиновая проба с целью отбора для ревакцинации, а также для оценки течения туберкулезного процесса.

Профилактика и лечение. Для специфической профилактики – живая вакцина БЦЖ-BCG (Bacille Calmette–Guerin). Штамм БЦЖ был получен при длительном пересеивании палочек на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи. За 13 лет была получена культура со сни­женной вирулентностью. В нашей стране в настоящее время вакцинируют всех новорожденных на 5–7-й день жизни внутрикожно. Ревакцинация – лицам с отрицательной туберкулиновой пробой с интервалом в 5–7 лет до 30-летнего возраста. Создают т.о. инфекционный иммунитет, при котором возникает реакция ГЗТ. Для лечения – АБ, химиотерапевтические препараты I ряда: тубазид, фтивазид, изониазид, дигидрострептомицин, ПАСК и II ряда: этионамид, циклосерин, канамицин, рифампицин, виомицин.

+ десенсибилизирующая терапия и стимуляция естественных защитных механизмов Ò.