Отдел 1. Eumycota, Настоящие грибы

Класс 1. Хитридиомицеты около 500 видов (ольпидиум, синхитриум)

Класс 2. Зигомицеты свыше 500 видов (мукор, фикомицес)

Класс 3. Аскомицеты около 30 000 видов (сморчок, строчок трюфель, дрожжи)

Класс 4. Базидиомицеты свыше 30 000 видов (шляпочные, трутовики, ржавчинные)

Класс 5. Несовершенные грибы, дейтеромицеты около 30 000 видов (триходерма, пеницилл, аспергилл)

3. Методы исследования микроорганизмов: микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и иммуно-химические, молекулярно-биологические.

Методы медицинской микробиологии

· Микроскопические (препараты для прижизненного исследования м/о и фиксированные препараты).

· Микробиологические (выделение м/о в чистой культуре и изучение физиолого-биохимических особенностей).

· Серологические (выявление антигенов м/о и антител в сыворотке крови).

· Биологические (заражение лабораторных животных и изучение инфекционного процесса)

Микроскопические методы исследования м/о

С использованием светового микроскопа

(предел разрешения 0,12мкм)

· Светлопольная микроскопия

· Темнопольная микроскопия (до 0,01мкм)

· Фазово-контрастная микроскопия

· Люминисцентная микроскопия

С использованием электронного микроскопа

(предел разрешения до 0,1нм)

Микроскопические методы исследований включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер (например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных особенностей. Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.

Микробиологические методы исследований — «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале. Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токситенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя. Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.

Биологические методы исследований направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце). Методы включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы. Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм-макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённых массы тела и возраста. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

Серологические методы исследований выявления специфических AT и Аг возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность они имеют в тех случаях, когда выделить возбудитель не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров AT, в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 сут (иногда этот интервал может быть более длительным). AT обычно появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig чётко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием, Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Иммунохимические методы анализа, основанные на специфическом связывании определяемого соединения соответствующими антителами, вошли в аналитическую практику и широко используются в различных областях медицины. Как правило, к антителу прикрепляется метка, которая обнаруживает себя при образовании комплекса «антиген — антитело». В качестве метки может использоваться фермент, осуществляющий цветную реакцию (иммуноферментный анализ), или флюоресцентный краситель (иммунофлюоресценция).

Антигеном — веществом, против которого могут быть получены антитела, могут являться белки, полисахариды, реже — нуклеиновые кислоты, т. е. довольно крупные молекулы или клетки, на поверхности которых такие молекулы имеются. Таким образом, иммунохимические методы выявляют не возбудителя заболевания, а молекулы, сопутствующие ему, следовательно, они являются непрямыми методами анализа.

Молекулярно-биологические методы диагностики основаны на идентификации ДНК и РНК, специфичных для данного вида микробов, и включают гибридизацию на основе ДНК-зондов и диагностику на основе ПЦР.

4. Морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. Методы микроскопического исследования микроорганизмов, способы окраски препаратов. Особенности микроскопического исследования грибов и простейших.

При микроскопии мазков изучают морфологические и тинкториальные (способность воспринимать красители) свойства культур бактерий: форму, структуру и размер клеток, наличие спор, капсулы, жгутиков, пилей, расположение клеток относительно друг друга, цвет в соответствии с использованными методами окраски, наличие и характер подвижности.

Два метода микроскопического исследования: метод прижизненного исследования(висячая и раздавленная капля, подкрашивают метиленовым синим, нейтральным красным, кислым фуксином), метод фиксированных мазков(приготовление мазка, высушивание препарата, фиксация, окраска). Фиксация в пламени, этиловом спирте, жидкости никифорова, холодном ацетоне.

Главным образом окрашивают анилиновыми красителями. Различают кислые и основные красители. Бактериальные клетки окрашивают основными. Различают простые и дифференцированные. При простой окрашивается вся клетка. Дифференциальная – определённых структур. Часто используемые: метиленовый синий, фуксин (в красный), генциановый фиолетовый, судан 3(жировые включения), черная тушь(для негативной окраски капсул), раствор люголя(выявления включений гликогена и гранулёзы), эритрозин(для почвенных).

Микроскопическое исследование патологического материала на грибы производят в нативных и окрашенных препаратах. На предметном стекле смешивают каплю воды и каплю красителя нейтрального красного. В полученную каплю осторожно вносят с помощью препаровальной иглы часть спороносящего мицелия изучаемой колонии гриба, накрывают покровным стеклом и микроскопируют при увеличении 40.

Фиксированные мазки из культур простейших и окрашивание по романовскому-гимзе. На предметном стекле готовят фиксированный мазок чистой или накопительной культуры простейших, окрашивают по романовскому –гимзе или фуксином. Микроскопируют в иммерсионной системе.

5. Структура и химический состав бактериальной клетки. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Использование структурных особенностей в целях диагностики.

Общий план строения

Строение бактериальной клетки (по Schlegel, 1972)

1 - гранулы поли-β-оксибутирата; 2 - жировые капельки; 3 - включения серы;

4 - трубчатые тилакоиды; 5 - пластинчатые тилакоиды; 6 - хлоросомы;

7 - хроматофоры; 8 - нуклеоид; 9 - рибосомы; 10 - цитоплазма;

11 - базальное тельце; 12 - жгутики; 13 - капсула;

14 - клеточная стенка; 15 - ЦПМ; 16 - мезосома;

17 - газовые вакуоли; 18 - ламеллярные структуры; 19 - гранулы полисахарида;

20 - гранулы полифосфата; 21 - карбоксисомы.

1.Поверхностные структуры

Жгутики*

Фимбрии (пили, ворсинки)*

Слизистая капсула*

Клеточная стенка

2. Внутренние структуры

Цитоплазматическая мембрана

Нуклеоид

Плазмиды*

Рибосомы

Мезосомы

Внутрицитоплазматические включения

Эндоспоры*