Морфология, ультраструктура и хим.состав спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм

Спирохеты – тонкие спирально извитые нити, изогнутые вокруг централ.оси. Клетки спирохет – это цитоплазматич.цилиндры, отграниченные цитопл.мембраной от тонкой и эластичной клеточной стенки, которая состоит из наружной мембраны и пептидогликанового слоя. Между ЦМ и цитоплазатическим цилиндром располагаются фибриллы, сост.из белка флагелина. Пучки фибрилл прикрепляются к дисковидным образованиям - блефаропластам. Фибриллы обеспечивают разные типы движения спирохет: поступательное, вращательное, сгибательное

Риккетсии – мелкие полиморфные бактерии кокковидной, палочковидной или нитевидной формы. Клеточная стенка как грам-отрицат.у бактерий..Являются облигат.внутриклеточными паразиатами

Хламидии – мелке бактериоподобные неподвижные бескапсульные грамотрицат. Бактерии. Патогенные внитриклеточные паразиты человека. Вне клеток хозяина существуют в виде телец сферичекой формы. В организме хозяина превращаются в ретикулярные тельца, которые начинают делиться – в результате чего образуются микроколонии хламидий. Покидая клетку они превращаются в элементарные тельца

Микоплазмы – бактерии, утратившие клеточную стенку в процессе эволюции. Мелкие сферической или овоидной формы. Клетки окружены мембраной, снаружи покрыт капсулоподобным слоем. Неподвижны, не образуют спор

18. Методы культивирования вирусов в культурах клеток, курином эмбрионе, в организме лабораторных животных. Классификация и характеристика клеточных культур. Среды №199, Игла, их назначение.Вирусы -гентические внутриклеточные паразиты, способные к размножению только в живых системах: культуры клеток, Куринные эмбрионы, лабораторные животные. Клеточные культуры: первичные, полуперевиваемые и перевариваемые клеточные культуры. Первичные клеточные культуры получают из ткани животного или человека путем разрушения протеолитическими ферментами межклеточного вещества. Разобщенные клетки в питательной среде образуют монослой. Клетки с помощью специальных реактивов можно пересадить в другой сосуд (пассаж). Первичные культуры выдерживают не более 5-10 пассажей. Для получения клеточных культур используют эмбриональную ткань человека или 8-12- дневные куриные эмбрионы. Перевиваемые (пассажные) клеточные культуры способны выдерживать неограниченное число пассажей. Они происходят из опухолевых клеток, утративших дифференциацию и не имеющих ограничений роста. Помимо стационарного способа культивирования с регулярными пассажами, возможно применение метода суспензионных культур, при котором клетки находятся в жидкой среде во взвешенном состоянии (непрерывно добавляют свежую питательную среду и удаляют отработанную). Полуперевиваемые (диплоидные) культуры - популяция фибробластоподобных клеток, которые способны к быстрому размножению, выдерживают до 30-60 пассажей и сохраняют исходный набор хромосом.В составе питательных сред для культур клеток имеется полный набор аминокислот, витамины, ростовые факторы. Выпускают готовые жидкие среды (199, Игла, гидролизат лактальбумина, сухие среды и концентраты), которые перед использованием обычно разводят в воде. Культуральные среды делят на ростовые и поддерживающие. Инфицирование живых систем вируссодержащим материалом. Культуры клеток: из пробирки сливают питательную среду и промывают клетки монослоя раствором Хенкса несколько раз. В каждую пробирку вносят 0,1—0,2 мл материала для вирусологического исследования. Спустя 30-60 мин после зааржения в пробирки вносят по 1 мл поддерживающей среды и помещают в термостат при 37С. Куринные эмбрионы: вируссодержащий материал вносят шприцем на хорионаллантоисную оболочку (ХАО), в желточный мешок, полости амниона и аллантоиса 6 - 15-дневных куриных эмбрионов. Введя необходимое количество вируссодержащего материала, поврежденные участки скорлупы заливают парафином. Эмбрионы помещают в термостат, укладывая яйца горизонтально Экспериментальные животные применяются для: диагностики вирусных инфекций, получения иммунных противовирусных сывороток и ингредиентов крови, моделирования вирусных инфекция для изучения патогенеза, иммунитета, патоморфологии; разработки методов специфической и неспецифической профилактики и лечения.

19. Методы индикации вирусной репродукции в клеточных культурах и курином эмбрионе. Сущность реакций вирусной гемадсорбции и гемагглютинации, их применение. Перед обнаружением вируса в живой системе его следует освободить от компонентов клеток хозяина: разрушают клетки трехразовым замораживанием и оттаиванием, материал подвергают центрифугированию для очистки от клеточного детрита и посторонних примесей, полученный материал обрабатывают антибиотиками для предотвращения бактериального загрязнения. Получают вируссодержащий материал. Обнаружение вирусов в культуре клеток. Выявление по цитопатическому действию (ЦПД). ЦПД - дегенеративные изменения в клетках, которые появляются в результате репродукции в них вирусов. Различают полную и частичную дегенерацию клеток монослоя. При полной дегенерации (вирус полиомиелита, Коксаки, ЕСНО) клетки монослоя подвергаются значительным изменениям, большее их количество слущивается со стекла. Частичная дегенерация имеет разновидности: а) по типу гроздеобразования (аденовирусы), б) по типу очаговой деструкции – пояляются микробляшки (оспа, грипп), в) по типу симпластообразования – клетки сливаются и образуют гигантскую многоядерную клетку (корь, паротит, пааргрипп, герпес, ВИЧ). Пролиферативный тип изменений характерен для некоторых онкогенных вирусов, трансформирующих клетки в злокачественные. Выявление по реакции гемадсорбции (РГадс). Эта реакция позволяет выявить вирусы до развития ЦПД благодаря адсорбции эритроцитов на поверхнотси клеток, инфицированных гемадсорбирующими вирусами. Гемадсорбция наблюдается лишь в том случае, если в процессе взаимодействия вируса с клеткой вирусный гемагглютинин встраивается в структуру наружной клеточной мембраны и тем самым изменяет ее свойства. Выявление по цветной пробе: в результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты =»индикатор феноловый красный становится оранжевым. При заражении культур клеток энтеровирусами или ретровирусами метаболизм клеток подавляется =» индикатор не меняет цвет. Выявление по внутриклеточным включениям: включения образуются при репродукции некоторых вирусов в цитоплазме и ядре клеток (оспа, бешенство, грипп, герпес). Электронно-микроскопическое выявление Выявление по образованию бляшек бляшки вирусов – очаги разрушенных вирусом клеток монослоя под агаровым покрытием. Вирусные бляшки подсчитывают для количественного анализа инфекциооной активности вирусов. Обнаружение вируса в куриных эмбрионах: зараженные эмбрионы выдерживают в термостате при 35-37С 48-72 ч. Затем яйца охлаждают и асептически вскрывают. Выявление по изменению ХАО: вирусы натуральной оспы, простого герпеса на ХАО образуют бляшки – беловатые выпуклые пятна диаметром 1-2мм, количество которых соответствует числу инфекционных частиц. Реакция гемагглютинации (РГА): показателем накопления ортомиксовирусов и паармиксовирусов является гемагглютинация куриных или других эритроцитов аллантоисной и/или амниотической жидкостью зараженных эмбрионов. Реакция основана на способности гемагглютинирующих вирусов склеивать эритроциты определенных видов птиц, животных и человека. Эти вирусы содержат поверхностные структуры – гемагглютинины, ответственные за агглютинацию эритроцитов. РГА ставят в пробирках, на специальных полистироловых планшетах, в аппарате Такачи. Результаты реакции учитывают после полного оседания эритроцитов в контроле: (++++) – интенсивная и быстрая агглютинация, осадок имеет вид коврика с фестончатыми краями («зонтик»), (+++) - осадок эритроцитов имеет просветы, (++) – менее выраженный осадок, (+) - хлопьевидный осадок эритроцитов и (-) – компактный осадок эритроцитов такой же, как в контроле.