Методы количественного измерения белков. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях

Абсорбция (оптическая плотность) ультрафиолета при 280 нм (диапазон: 0,1-100 мкг / мл)

Ароматические аминокислоты тирозин и триптофан придают белкам характерный ультрафиолетовый (УФ) спектр поглощения при 280 нм, который обычно используется для оценки концентрации белка. Фенилаланин и дисульфидные связи также способствуют поглощению при этой длине волны, хотя и незначительно. Этот способ прост и требует очень небольшого объема образца, так как новые спектрофотометры используют систему удержания образца во время измерения. Однако белковый образец должно быть чистым и не содержащим никаких небелковых компонентов с тем же спектром поглощения, таких, как нуклеиновые кислоты

Анализ на основе бицинхониновой кислоты (БХК) или меди (диапазон: 20-2000 мкг / мл)

Анализ на основе бицинхониновой кислоты (БХК) был изобретен Полом К. Смитом в 1985 году в Pierce Chemical Company, крупном дистрибьюторе этого анализа [2] [3]. И БХК анализ, и Lowry анализ основаны на преобразовании Cu2+ в Cu1+ в щелочной среде. Это преобразование определяется как реакции Биурета. Эта реакция зависит от четырех аминокислотных остатков (цистеин, цистин, тирозин и триптофан), а также от пептидной структуры.

Анализ белков методами Брэдфорда или с применением Кумасси бриллиантового синего (диапазон: 20-2000 мкг / мл)

Аналитический метод Брэдфорда, первоначально описанный доктором Марионом Брэдфордом в 1976 году, является одним из самых распространенных методов определения концентрации белка. Он основан на образовании комплекса между красителем Кумасси бриллиантовым синим G-250 и белками в растворе.

Анализа белка методом Лоури (диапазон: 10-1000 мкг / мл)

Анализ методом Лоури, предложенный Оливером X. Лоури в 1951 году, основан на двух химических реакциях. Первой реакцией является снижение ионов меди в щелочной среде, которые образуют комплексы с пептидными связями (реакция Биурета). Второй реакцией является снижение реагента Folin-Ciocalteu комплексом медно-пептидной связи, которое впоследствии приводит к изменению цвета раствора на синий с поглощением в диапазоне от 650 до 750 нм, обнаруживаемого с помощью спектрофотометра[1]. Количество белка в образце может быть оценено с использованием стандартной кривой выбранного стандартного раствора белка, такого как БХК.