Количественный анализ

Количественный анализ основан на пропорциональности между количеством вещества в пробе и высотой или площадью соответствующего хроматографического пика. Наиболее критическим этапом с точки зрения внесения погрешности является определение площади хроматографического пика. Существует несколько способов связывания характеристик пика с количеством введенного вещества. Абсолютная калибровка

Получают хроматограммы известных количеств извест­ных соединений и строят калибровочный график, на одной из осей которого откладывают площади пиков, а на другой — вес введенной пробы (рис. 48). Затем на хроматографическую колонку подают точное количество смеси неизвестного состава и площадь пика интересующего соединения сравни­вают с площадью пика стандарта.

Содержание компонента, %

Рис. 1. График абсолютной калибровки.

Процентное содержание стандарта в исследуемой смеси можно определить либо по калибровочному графику, либо рассчитать по формуле:

% В = S_В/К,

где К — тангенс угла наклона прямой, полученной на ка­либровочном графике. Наряду с площадями в расчетах мо­гут быть также использованы высоты пиков.

Недостатками описанного калибровочного метода явля­ется необходимость ввода точных количеств пробы, а так­же то, что сам процесс калибровки отнимает много времени.

Кроме того, повышаются требования к детектору, чувстви­тельность которого должна оставаться постоянной от опыт а к опыту для того, чтобы можно было проводить сравнение полученных результатов с калибровочным графиком.

Внутренняя стандартизация Этот метод известен также под названием относительной, или косвенной, калибровки. Хроматографируют специаль­но приготовленные смеси с известным весовым соотноше­нием анализируемого вещества и стандарта. Измеряют пло­щади пиков. Затем строят график зависимости отношения площадей пиков от величины весового соотношения компо­нента и стандарта в смеси (рис. 49).

При анализе смеси неизвестного состава к ней добавляют точное количество внутреннего стандарта и хроматографируют. Измеряют отношение площадей пиков и по калибро­вочному графику определяют весовое отношение интересу­ющего вещества к стандарту. Для определения количества какого-либо компонента смеси остается провести лишь не­большой расчет, так как количество добавленного стандар­та известно.

К = q_комп./q_ст.

Пример. К неизвестной смеси добавлено 5 мл раствора, содер­жащего вещество-стандарт в концентрации 100 мкг/мл. После хроматографирования этой смеси величина отношения площадей пиков составила 8. Поэтому, как видно из графика, приведенного на рис. 2, весовое отношение равно 7. Зная, что концентрация стандарта равна 100 мкг/мл, получим концентрацию компонента: 7 • 100 мкг/мл. Так как мы добавили 5 мл раствора стандарта, то общее количество неизвестного равно 5 (мл) • 700 (мкг/мл) = 3500 мкг или 3,5 мг.

Достоинствами этого метода калибровки является то, что нет необходимости вводить точные количества пробы и знать коэффициенты чувствительности детектора или иметь их постоянными, так как любое изменение чувстви­тельности не окажет влияния на величину отношения пло­щадей. Основной недостаток этого метода связан с тем, что обычно трудно найти стандарт, который не мешал бы опре­делению интересующего вещества.

Внутренний стандарт должен удовлетворять следующим требованиям:

а). проявляться на хроматограмме в виде пика, хорошо отделенного от остальных пиков;

б). отстоять на хроматограмме недалеко от веществ, представляющих интерес;

в). иметь концентрацию, близкую к концентрации исследуемого компонента;

г). иметь строение, близкое к строению исследуемого компонента.